我是96孔板贴壁细胞做的，吸尽培养基后加PBS洗3次，每次5分钟。
加-20℃无水乙醇后4℃放30min固定，PBS洗3次，每次5分钟。
加DAPI染液20μL，避光2min。
吸除染液，PBS洗3次，每次5分钟，荧光显微镜观察。
以上是我的实验步骤，我觉得拍出来的不够清晰，而且细胞周围看起来很糊，但不知道是什么原因，请各位老师，师兄师姐帮我分析下，谢谢你们。我试过加染液30μL、染色5min（染液是碧云天的，直接用），但拍出来的效果还没现在好。

拍摄-1762.jpg

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引用回帖:2楼: Originally posted by daibingling at 2014-05-12 11:21:12
我觉得你的背景还是很蓝，dapi染完以后可以充分的洗，多洗几次，就会好很多
嗯，我正准备用PBS多洗几次。

引用回帖:5楼: Originally posted by schorr at 2014-05-13 09:40:44
确定是显微镜目镜和CCD采集不同步的问题
要在目镜下看清楚后再在屏幕上看着进行微调
清晰后再采集图片
可避免你照片发虚的问题
我在视野里观察的时候，细胞本身就很模糊，拍照预览的时候是微调到最佳效果的。“目镜和CCD采集不同步”这个我不懂了，求教
，

引用回帖:4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-13 09:25:35
染色没问题，照相聚焦不对
我让老师看了图片，也说是聚焦不对，可我是调到最好状态时再拍的，还是模糊。

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