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2021-08-03重组质粒酶切正确，测序正确，有微弱荧光，但是外源性抗体antiFlag都砸不到！！

小泥人-墨点
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我的目的蛋白D2，是膜表达蛋白，构建了三种载体的重组质粒，分别为CMV,pCDNA3.1,pEGFP-N1,三个重组质粒酶切正确、测序正确，也曾表达过，可以砸出相应大小的目的条带。大提过后，有近一个半月没有进行转染表达，突然发现我的质粒不能砸出目的条带了，甚至外源性的anti-Flag都砸不到（pEGFP重组质粒转染可以观察到微弱荧光，比以前较少），已经重修小提过，也重新进行了酶切，进行测序，都没有问题，现在就是砸不到条带（阳性对照的Flag每次都可以），请各位大神帮忙！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！

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回复：时间：2021-08-11

我的目的蛋白D2，是膜表达蛋白，构建了三种载体的重组质粒，分别为CMV,pcDNA3.1,pEGFP-N1,三个重组质粒酶切正确、测序正确，也曾表达过，可以砸出相应大小的目的条带。大提过后，有近一个半月没有进行转染表达，突然发现我的质粒不能砸出目的条带了，甚至外源性的anti-Flag都砸不到（pEGFP重组质粒转染可以观察到微弱荧光，比以前较少），已经重修小提过，也重新进行了酶切，进行测序，都没有问题，现在就是砸不到条带（阳性对照的Flag每次都可以），请各位大神帮忙！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！

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