2009-03-16【求助】PCR中的DNA聚合酶和载体的选择问题，希望大家帮忙

用Pfu高保真酶扩增！载体选择PcDNA3.1

谢谢，你的帮忙，我十分感谢，不过我稍微查了一下你说的载体，好像是5000多，我们老师不会给我买的，能给我推荐一个便宜一些的吗，300、500的，十分感谢，无限感激

希望大家帮忙啊！！！我的平端载体应该选哪个啊

我们有top克隆平端载体，需要请联系我

如果有条件最好用 PrimeSTAR GXL 如果没有那个条件可以用Prime STAR HS如果GC含量高可以用Prime STAR HS with GC buffer

Prime STAR HS with GC buffer 真的很好用吗，我正在考虑呢

如果从费用角度来考虑 LA taq with GC buffer 是非常好的。一般做5‘RACE我都用这个，LA Taq配GC buffer I 基本无敌，但是有的时候会有个别碱基错配。prime STAR的扩增效率能低一点，保真效果好，这个看实际情况决定。

谢谢楼上的朋友，我的基因要去测序，要有保真性，呵呵，我想问问这prime STAR对于引物有没有要求啊，要求引物磷酸化吗??期待回来。。。。。。。。。。。。。。。。。。

引物没有特殊要求，一般的PCR级别引物就可以。以下是说明书：http://www.takara.com.cn/explain/E/DR010A.pdfhttp://www.takara.com.cn/explain/E/DR044A.pdf需要注意的是这个酶是HS版本的，在PCR程序设定时最好在前面先加一步94度3分，这个说明书上没有提到，本人一般使用其中的2 step PCR反应条件。

楼上的jk_xdx 十分感谢你的提醒，要不然我要走很多的弯路呢，好人好梦呵呵