2021-07-27【求助】关于高保真DNA聚合酶的选择

其实现在选择很多：1.takara 有两种酶，贵一点的好一些，但也有人反映有是不好用2.invitrogen的酶选择较多，比如：GeneAmp® XL PCR Kit就较好，扩增效率高，保真性也高。其实也不算贵，使个破酶，多折腾机会，还不如买个好的呢。我给你一个该公司各种酶的特点比较，看看，在决定。Feature Guide for PCR Enzymes.pdf(41.31k)

谢谢！

我用的GoldenTaq感觉很好,也是在坛上淘宝得到的,现在我们实验室的师姐师弟们都用它,保真性和扩增效率都很好,关于对它的介绍,是坛子里的一位战友名叫zyBDxy战友发的帖子,现转贴在下面:"<DNA聚合酶的选择>"耐高温DNA聚合酶的选择对于实验目的、实验的准确性、稳定性等均是成败攸关。从扩增的速率和忠实性来考虑,耐高温DNA聚合酶可分为三类：第一类：扩增效率高,但没有校正功能。该类聚合酶具有很强的从5’→3’方向合成DNA功能，但没有从3’→5’方向外切酶的活性。该类酶的合成效率高，但合成过程中出现的错误不能被有效纠正，我们的实验数据表明，在80%的克隆中，每一个kb可能会产生1～2突变。该类酶的代表就是普通Taq酶（TaqDNAPolymerase），它扩增效率高，广泛应用于DNA片段大小的鉴定和菌落克隆鉴定，由于该酶尚能在合成的DNA的3’端羟基上加A，故而还用于PCR产物的T载体克隆。因该类酶不具有纠错功能，因而其扩增产物不宜用于基因突变检测和以基因表达及功能研究为目的之基因克隆。市售的所谓PlatinumTaq据称有3’→5’方向外切酶的活性和纠错功能，但笔者在美国做博士后研究期间用它来做批量克隆，测序结果发现其突变频率与普通Taq酶没有多少差别，对其印象深刻，因而它应被归类为普通Taq酶类。第二类：既具有5’→3’方向合成DNA的功能，又具有3’→5’方向外切酶的活性和纠错功能，但DNA合成效率与普通Taq酶相比大大降低。PfuDNA聚合酶便是这一类酶的代表，据称，Pfu的保真度在所有耐热DNA聚合酶中是最高的。我们以Pfu作为批量克隆中的工具酶，测序结果表明，0.8～1.5kb的扩增片段，50%的克隆发现有突变；而1.8kb以上的扩增片段克隆中，突变的发生几乎无一幸免。第三类：兼有第一类和第二类酶的优点。从形式上看，将普通Taq酶与PfuDNA聚合酶按一定比例混合即可（如TaqPlus,LATaq,ExTaq），并为很多公司和研究者所采用，但混合后由于二者对底物模板存在竞争性以及酶促反应动力学的紊乱而影响最终效果，于是，用基因工程的方法获得理想的第三类酶便成为PCR领域的一块研发高地。泛基诺公司科研人员，利用丙氨酸扫描技术鉴定出聚合酶和外切酶活性的最小结构域和相关的活性位点，进而用遗传学和基因工程方法获得既能高效扩增又具有很强的校正功能的金牌Taq（FGGoldenTaqDNAPolymerase），稳定性高于普通Taq酶，纠错功能强于Pfu(见下表)PCR产物克隆的基因p53NF-kBhRAD17SP1Apo-AVPPARγSRC1片段大小1.2kb1.7kb2.0kb2.4kb1.3kb1.43kb4.2kb获得无突变序列所筛选的克隆数FGGoldenTaq1,1,1,2,1,1,2,Pfu2,3,3,4,2,3,NA＃＃备注：NA代表NotAvailable

http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html