DNA聚合酶

大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段实验一标记DNA的3‘末端

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实验方法原理
选用本方法可产生用于放射自显影的32P末端标记分子量标志物。放射自显影带的强度与片段长度无关,标记DNA可稳定数月之久。
 
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 在20μl反应体积中,用可产生5’突出端的限制性内切酶消化0.1~0.4μgDNA。
 
2. 加入20μlCi所需的[α-32P]标记下dNTP(400~800Ci/mmol)和1μl5mmol/l3dNTP混合液。

3. 如需要高比活,可加入80μCi[α-32P]标记的dNTP,加入1Uklenow酶,30℃’温育15min。
 
4. 75℃加热10min以终止反应。如果需要,从标记DNA中去除未掺入的前体dNTP。