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大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段实验一随即寡核苷酸引物介导
蚂蚁淘
/发布时间:1628357402 /浏览量:157
| 实验方法原理 | 此法是一种用以产生高放射比活、放射标记均匀分布的04八片段的切口平移方法。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | DNA 试剂、试剂盒 | TEdNTP 仪器、耗材 | 水浴锅
实验步骤 | 2. 在冰浴中混合下列物质： （1）2.5μl0.5mmol/l 3dNTP混合液 （2）2.5μl 10×klenow酶缓冲液 （3）5μl 3000Ci/mmol［α-32P］标记dATP （4）1μl klenow片段 3. 将30~100ngDNA与随机核苷酸六聚体（1~5μg）混合至14μl，煮沸2~3min，置于冰浴。 4. 加入11μl得自步骤2的混合物，立即在室温温育2~4h。 5. 加入1μl0.5mol/lEDTA以终止反应，加入3μl10mg/mltRNA和100μlTE缓冲液。 6. 酚抽提，移上清至一个新离心管中。 7. 用层析法将未掺入的放射性前体dATP从标记DNA中去除。 7. 取出1μl小份样品确定32P的掺入效率。（比活度应为108cpm/μg）
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