1.Growcellsin5ml(ormore)ofLB-Ampovernightforastarterculture.2.Growlargercultureusingtheovernightcultureasaseedingculture.ThecultureisgrowninLB-Ampmedium.Aeratewellwithshakingat37CuntilODat600nmis~0.6.3.AddtheappropriateamountofIPTGstocksolutiontotheculturetoobtainafinalIPTGconcentrationof~2mM.4.Continueshakingforseveralhoursuptoovernight.5.SpindowncellsandresUSPendpelletin1/100initialvolumeofcultureintolysisbuffer--PBS-CMF,2mMEDTA,10mMDTT,PMSF,benzamidineand0.5MNaCl.6.Cellsarelysedbysonicationat4C.7.AddTritonX-100to1%finalconcentration.8.Centrifugeat20-30Krpminultracentrifugeat4Cfor30min.9.Filtersamplethrougha0.45mporesizemembrane.MixthisfilteredsupernatantwithglutathioneSepharose4BwhichhasbeenwashedwithPBS-CMF,10mMDTT,0.5MNaCl.10.Rotatethefilteredsupernatant/sepharoseat4Cfor30-60min.11.Spin,removeliquidandwashthesepharose2xwithPBS-CMF,10mMDTT,0.5MNaCl.12.Elutethefusionproteinfromthesepharose3xwith10mMglutathione,50mMTrispH8.0,10mMDTT,0.5MNaCl.13.Dialyzefusionproteinagainst50mMTrispH8.0,10mMDTT,0.5MNaCl

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