一、材料

1.缓冲液和溶液

(1)CsCl（固体）

(2)CsCl溶液



(3)乙醇

2.离心机和转子

(1)BeckmanSW41或SW28转子或相当型号

(2)BeckmanTi50或SW50.1转子或相当型号，配有清亮的离心管（如Beckman超亮离心管）

3.专用设备

皮下注射用针头（21号）

4.载体和菌株

λ噬菌体悬浮液

二、方法

1.测定噬菌体悬浮液的体积，每毫升加入0.5g固体CsCl，搅拌混匀使其完全溶解。

2.倒入足够量的CsCl分级梯度，使噬菌体悬浮液分成几个组分，每个梯度能容纳约16ml噬菌体悬浮液。所需分级梯度的量等于亲水相的最终体积（步骤1），亲水相又被分成数份，每份为0.4X离心管体积。用适合于BeckmanSW41或SW28转子（或相当型号）的清亮塑料离心管（如Beckman超亮离心管)。



3.在ρ=1.50g/ml和ρ=1.45g/ml两层界面的相应试管壁外侧，用永久性标签笔作上标记。



CsCl分级梯度大约占超离管体积的60%。比如，对一个能装38ml的BeckmanSW28试管（或相当型号），分级梯度由三种均为7.6ml的CsCl溶液组成。平衡管装有同样密度的CsCl溶液。

4.小心地将噬菌体悬浮液加至分级梯度上，4℃，87000g(22000r/min于BeckmanSW28转子中）离心2h。

5.按下面的方法对离心管进行穿孔，以收集噬菌体颗粒。

(1)用酒精仔细地擦去离心管外的油污，然后在离心管的外侧贴上Scotch胶带，与噬菌体颗粒带平齐。

胶带起到封条的作用，防止针头四周渗漏。

(2)用21号皮下注射用针头（不需要注射针筒）穿过胶带刺入离心管，收集噬菌体颗粒带。



手指远离针头刺入方向，以免剌穿离心管。注意不要使梯度中其他带内物质污染噬菌体颗粒。这些带内含有细胞碎片和未装配的噬菌体成分。

6.将噬菌体颗粒悬浮液装入适宜于BeckmanTi50或SW50.1转子（或相当型号）的超离管中，加入CsCl溶液（ρ=1.5g/ml于SM中)。4℃，150000g(41000r/min于BeckmanTi50转子中）离心24h或160000g(36000r/min于BeckmanSW50.1转子中）离心24h。



7.如步骤5所述收集噬菌体颗粒带，于CsCl溶液中4℃密封保存于一试管中。

8.(可供选择）如果必要，噬菌体颗粒可通过新一轮的CsCl平衡梯度离心进一步纯化和浓缩。将噬菌体悬浮液转移至适宜于BeckmanSW50.1转子（或相当型号）的一个或多个超离管中，加入CsCl溶液（ρ=1.5g/ml于SM中），160000g(36000r/min于BecrkmanSW50.1转子中）4℃离心24h。当离心完成后，如下面“替代方案”的步骤3和4所述收集噬菌体颗粒。