一、材料

1.缓冲液和溶液

乙醇

异丙醇

酚：氯仿（1:1,V/V)

TE(pH7.6)

TE(pH7.6)含0.1mol/LNaCl

TE(pH7.6)含0.2mol/LNaCl

TE(pH7.6)含0.3mol/LNaCl

TE(pH7.6)含0.6mol/LNaCl

2.核酸与寡核苷酸

DNA样品应溶于TE(pH7.6)中

3.专用设备

一次性小柱子或2ml注射器

树脂、预溶胀的DEAE-纤维素或DEAE-Sephacel

二、方法

1.DEAE悬浮在20倍体积含0.6mol/LNaCl的TE(pH7.6)中。待树脂沉降后，吸去上清。再加20倍体积含0.6mol/LNaCl的TE(pH7.6)，轻轻地将树脂重新悬浮起来。树脂重新沉降后，吸去大部分上清液。平衡后的树脂可于4℃保存。

2.取0.6ml（足以结合20μgDNA)的DEAE悬浮液装一小柱或2ml注射器针筒。

3.分别用下述溶液洗柱：

0.6mol/LNaCl的TE(pH7.6)3ml，TE(pH7.6)3ml，0.1mol/LNaCl的TE(pH7.6)3ml。

4.将DNA(溶于pH7.6的TE中）与等体积含0.2mol/LNaCl的TE(pH7.6)混合，混合液上样到层析柱上，收集流出液重新上柱。

5.1.5ml含0.3mol/LNaCl的TE(pH7.6)洗柱2次。

6.0.5ml含0.6mol/LNaCl的TE(pH7.6)洗脱DNA,共3次。

7.用酚:氯仿抽提洗脱液1次。

8.将水相等体积的分装在两个微量离心管中，每管加等体积的异丙醇，室温放置15min,于4℃最大转速离心10min回收DNA。

9.用70%乙醇小心清洗沉淀，将离心管口打开，置操作台上数分钟使乙醇挥发。然后将DNA重溶于小体积（3~5μl)TE(pH7.6)中。

10.通过聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶电泳对DNA片段进行定性和定量。

(1)将少量（估计含有20ng)最终制备的DNA片段与10μlTE(pH8.0)混合，加2μl所需的凝胶载样缓冲液。

(2)加样并在适当浓度的聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶上进行电泳，以已知量的经用适当限制酶消化的原DNA作为标准参照物。分离的DNA片段应与限制酶消化物中的正确片段同步迁移。

(3)仔细检査凝胶，看是否有弱荧光带存在。弱荧光带的存在表明有DNA污染。通过分离片段与标准参照物的相对荧光强度，常可估计最终制品中的DNA量。

极少数情况下，回收的DNA还需作进一步纯化。最好的方法是再次采用DEAE-Sephacel层析法或采用不同厂家提供的特异性树脂。很多树脂都是预先制成一个小柱子，适合用微量离心机来纯化少置的DNA。与环状质粒DNA相比，树脂更宜于纯化线状DNA分子。