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腺病毒试剂盒纯化病毒
腺相关病毒(AAV)是一种非包膜的线性单链DNA病毒。AAV有100多种血清型,病毒的宿主特异性和特征在不同血清型之间也有所不同。AAV对人类无致病性,只有在辅助病毒(如腺病毒或疱疹病毒)存在的情况下才会复制。
腺相关病毒载体(AAV载体)利用AAV的特性,可以将基因转导至细胞和生物体中。AAV载体不仅是一种生物学研究工具,也作为基因治疗载体而为大家所熟知。AAV载体要比腺病毒和逆转录病毒载体更安全些。另外,AAV具有很低的免疫原性,适合于动物个体基因导入(作为体内转导工具)。
想要在培养的细胞和个体动物中获得有效稳定的基因导入结果,AAV病毒粒子的纯度和滴度是重要的影响因素。尤其在AAV粒子纯化方面,常用的纯化方法为氯化铯密度梯度超速离心法和碘克沙醇超速离心法。然而,这两种方法不仅耗时长,而且还需要专用设备和娴熟的操作手法。
所谓 熟能生巧 , 人生还长 ?不不不……刚刚复工没多久,已经没有太多时间去消耗。AAVpro Purification Kit(All Serotypes)可用于在大约4个小时内简便有效地从AAV粒子制备细胞中纯化出AAV粒子,耗时短,操作简便,不需要超速离心机等专用设计,更重要的是还适用于各种血清型,可以在不同血清型之间无缝切换。
AAVpro Purification Kit(All Serotypes)
使用AAVpro Purification Kit (All Serotypes)纯化不同血清型AAV粒子,不仅可确保高纯度,而且纯化后的粒子依然保持其感染能力。
制备不同血清型(1、2、3、5、6型血清型)AAV病毒粒子,使用该试剂盒分别进行纯化,之后使用AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2(Code No. 6233)测定病毒滴度并进行SDS-PAGE检测。SDS-PAGE结果显示(左图),对于本次检测的所有血清型病毒粒子,观察到的主要条带均为AAV衣壳蛋白质(VP1,VP2和VP3),其它杂质很少。使用纯化后的AAV病毒粒子分别感染CHO、RD、HT1080细胞。感染3天后,流式细胞仪检测结果表明(右图),使用该试剂盒纯化的AAV粒子能够成功感染本次测试的细胞类型。
说明:以上为AAVpro Purification Kit Maxi (All Serotypes) (Code No. 6666)实验结果。
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