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各位大侠:俺在提取细胞总蛋白时，蛋白质提取出像果冻一样的东西，俺的步骤如下:
1细胞用冷PBS洗两遍，离心，去除上清；
2加50～100ul三去污细胞裂解液；
3加PMSF，AP各1ul;
4用100ulTIp头吹打数次；
5置冰上15分钟
612000rpm,15min,4度
7取上清。这时，上清呈黏液状，用枪头吸时会将细胞碎片一起吸出。拉丝度很长，测蛋白浓度显示有，各位，这是怎么回事？做WB会影响结果吗？这种蛋白质在保存过程中会容易降解吗?
有的资料上显示第四步，不是用Tip头吹打，而是将EP管在桌上猛敲击几下，这个方法我也试过，但是结果蛋白浓度很低，没有出现上述现象，这是怎么回事呀?
1细胞用冷PBS洗两遍，离心，去除上清；
2加50～100ul三去污细胞裂解液；
3加PMSF，AP各1ul;
4用100ulTIp头吹打数次；
5置冰上15分钟
612000rpm,15min,4度
7取上清。这时，上清呈黏液状，用枪头吸时会将细胞碎片一起吸出。拉丝度很长，测蛋白浓度显示有，各位，这是怎么回事？做WB会影响结果吗？这种蛋白质在保存过程中会容易降解吗?
有的资料上显示第四步，不是用Tip头吹打，而是将EP管在桌上猛敲击几下，这个方法我也试过，但是结果蛋白浓度很低，没有出现上述现象，这是怎么回事呀?
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回复：时间：2004-07-02
应该是DNA之类的东西了，不影响WB结果的，但溶液中核酸含量过多可能会影响蛋白定量，比如用OD280的值来测蛋白就不准确，如果提取的蛋白无需定量也就没什么问题了第二个问题，我猜是细胞没有充分裂解，也许单靠敲打无法充分悬浮细胞，所以溶液中既没有DNA成分，蛋白浓度也低，所以还是吹打为好仅供参考，你可以用几种方法都试试看WB
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