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蛋白的裂解与提取步骤
这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol,希望对大家有所帮助。10ml三去污裂解液配方如下:50mmol/LTris-cl(pH8.0):0.07882g150mmol/LNaCl:0.08775g0.2g/L叠氮钠:0.002g1g/LSDS0.01g100mg/LAprotin0.001g10g/LNP-400.1g5g/L去氧胆酸钠0.05g100mg/L苯甲基磺酰氟(PMSF)0.001g总蛋白抽提程序:1.PBS洗细胞3次2.加入裂解缓冲液(1.5x106个细胞大约加入100µL裂解液,或100ml细胞瓶中加入100µL裂解液),冰上放置20min3.收集裂解液4.离心,12000转,2~10min5.吸取上清,蛋白定量,分装,保存在-80度备用
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