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GFP骨的冰冻切片实验方法

ProtocolforFrozensectionofGFPBone:

    1. Fixthebonein4%Paraformaldehydeat4�Cunderconstantagitationfor3days.
    2. Decalcificationin14%EDTAsolutionat4�CorRTunderconstantagitationfor3~5days(changefresh14%EDTAsolutionevery24hours).
    3. WashinPBSfor2hours.
    4. Soakin30%SucroseinPBSat4�Cunderconstantagitationovernight.
    5. EmbedboneinOCTcompound.
    6. Cut5µmthickfrozensectionsusingcryostatandallowthesectionstodry(keepindark).
    7. RinseinPBS5minx2.
    8. Soakin1mMMgCl2inPBSfor30min.
    9. RinseinPBS5min.
    10. Mountcoverslideusing50%GlycerolinPBS.
    11. Examinebyfluorescencemicroscopy.

Solution:

4%Paraformaldehydein0.1MPBS:
  • HeatPBSto~65�CtodissolveParaformaldehyde,thencoolitandadjustpHto7.4.(usefreshsolution)

Decalcificationsolution:

  • 280gEDTA
  • ddwater1.5L
  • 180mlAmmoniumHydroxide
  • MixwellandadjustpHto7.1withAmmoniumHydroxide
  • Addwaterto2L.

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