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悬浮细胞的免疫荧光标记实验一基本方案

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实验材料	悬浮细胞
试剂、试剂盒	多聚-L-赖氨酸
仪器、耗材	离心机培养箱
实验步骤	1. 细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机于4℃以800g离心5min，吸去培养液并以4℃PBS重悬细胞。 2. 离心吸去PBS，以1~2ml2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1%TritonX-100重悬细胞，置冰上固定30min。 3. 离心、吸去固定液，用15ml4℃PBS重悬细胞，放5min后，用PBS再次洗涤细胞。 4. 稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13500g离心2min，250μl抗体足够用于5×10⁶细胞。 5. 离心细胞，吸去PBS，重悬细胞于第一抗体中，置4℃温育1h。 6. 用4℃PBS稀释细胞和抗体至15ml。 7. 离心，吸去PBS，以4℃PBS重悬细胞，重复1次。 8. 第二抗体4℃用微量离心机以13500g离心2min，5×10⁶细胞用250μl抗体足够。 9. 吸去PBS，以第二抗体重悬细胞，4℃温育1h，重复步骤6及步骤7。 10. 除非立即观察细胞，否则在进行细胞浓缩的下一步操作之前应以铝萡包裹离心管并冷藏。 11. 离心细胞并以少量PBS重悬（勿用水），将细胞悬液滴于多聚-L-赖氨酸覆层的载玻片上，加上盖玻片，尽可能马上观察结果。