Aptamer的稳定性考察—聚丙烯酰胺凝胶电泳 Aptamer识别肿瘤细胞 若选择4℃识别，则需要提前控温离心机，且样品在上样检测前宜放置于冰中；37℃就不用控温了。Aptamer浓度：荧光标记的是50μM，没有标记的是100μM DNA提取-----注意实验中戴好橡胶手套，穿好实验服，以防苯酚粘到皮肤上。 1.取7.3μlaptamer（100μM）于1460μl小鼠血清（无需过滤）中，在37℃细胞培养箱中孵育； 2.于不同时间点（6h,5h,4h,3h,2h,1h,1min）取200μl该小鼠血清到新的EP管中，加入200μl（等体积）的苯酚-氯仿（取苯酚-氯仿之前先将苯酚-氯仿混匀），混匀，管中溶液变浑浊；3.用15000转/分离心10分钟，管中出现3层：上清、白色变性蛋白层、苯酚层； 4.取上清到新的EP管中。在原EP管（变性蛋白层和苯酚层）中加入200μlTE溶液，混匀（该步进一步提取残留的DNA）； 5.用15000转/分离心10分钟，收集上清；6.重复4、5步直到上清澄清； 7.在上清中加入等体积的氯仿（用于去除苯酚），混匀，用15000转/分离心10分钟，取上清到新的EP管中；8.加入等体积乙醚（用于去除氯仿），混匀后静置10分钟，弃上层乙醚（乙醚比水轻，在上层）；9.重复步骤8，敞开管盖15分钟，待乙醚挥发； 10.加入1/10体积的3MNaAc、2倍体积的无水乙醇，放置于-20℃冰箱中30分钟（DNA沉淀）；11.用16500转/分（转速不宜再高，EP管容易破裂！）离心30分钟； 12.将管中溶液吸出，转移至新的EP管中。原管中保留约30μl溶液，打开管盖，待管中溶液蒸发；（我通常将EP管敞开，封上封口膜，再扎7、8个孔，放在通风橱中过夜。）（管底看不到沉淀，因为DNA含量太低。）13.在管中加入16μL1*TE溶液； 14.进行电泳分析前，将样品在95℃水浴中加热10分钟（小心管盖冲开或进水），在冰上骤冷（使DNA成单链），上样或保存在-20℃冰箱中。 聚丙烯酰胺凝胶电泳------注意实验中戴好手套！！！