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染色体制备体会
1、培养基PH浓度、小牛血清量及培养箱温度的恒定是培养成功关键; 2、秋水仙素适量、适宜的处理时机和时间,是获得良好、足够分裂相的条件。分裂相的多少和染色体形态及带型处理良好与否均受其影响。 3、低渗处理是获得分散良好的分裂相关键步骤,低渗过度或不足都会造成染色体形态不良的结果。在低渗处理时期细胞十分娇嫩,并且表面发粘,低渗细胞混匀时,吹打要适宜,避免细胞破碎及粘团,另外不要将细胞吸到吸管上部及离心管上部,避免细胞丢失。 4、固定技术是制备良好分散的染色体的重要步骤。若染色体分数不良,可适当加大冰乙酸含量,其同时有改善由于低渗处理不够或固定不充分所造成的缺陷,但过量会造成染色体形态变化和影响分带结局。染色体形态不良与固定液速度有关,加第1次固定液过快或打过快,可造成飘带样染色体;5、固定液每次使用必须新鲜配制,否则将会形成酯类,从而影响固定效果。6、滴片是染色体制备中影响染色体形态的关键一步。首先要载玻片要非常干净,否则会影响染色体的分散和分带效果。其次是滴片的距离、滴加量多少、制片的方式都会影响染色体分期效果。7、烤片:是染色体制备中最后一步技术。烤片的温度、时间与染色体形态和分带有关。不宜温度过高和烤片时间过长。
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