Day-1:PassEScellsatnormaldensityongelatinizedplatetofreethecultureofcontaminationfibroblastcells.

____________________

Day1:Trypsinizedthecellsasfornormalpassaginguntilthecoloniesliftoff.Trytokeepthelooselyconnectedclumpsofcellstogetherbygentlehandling.Thendirectlyplatethecells1:3intobacterialgradePetridishesinLIFfreeEScellmedium.

Day3:Aspiratethemediumcarefully.Avoidsuckinguptoomanyoftheaggregates.Thenaddnewmedium.

Day5:AspirateasinDay3andreplacethemedium.

Day7:Platethecellsinto24weeltissueculturegradeplate

Day9:Changehalfofthemediumandobservebeating

Day11:Changehalfofthemediumandobservebeating

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