克隆基因

定点诱变实验一利用PCR引物点突变

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实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 制备模板(见基本方案,步骤1和2)
 
2. 合成和纯化寡核苷酸引物并对5‘端磷酸化。
 
3. 扩增模板DNA(基本方案,步骤4和5),在最后一次延伸结束后,加5U的klenow酶,30℃保温15min。

4. 分析并处理反应产物(基本方案1,步骤6和7)。

5. 取所得扩增片段的一半量用侧翼序列内的限制性内切酶切割,低熔点琼脂糖凝胶电泳纯化酶切片段。
 
6. 将两个扩增的片段通过平末端连接亚克隆入合适的载体

7. 按基本方案1,步骤10、11进行。
 
其他