2017-11-10pEGFPN1载体的优点

与以往常用的报告基因相比，GFP具有以下优点：①在荧光显微镜下，用波长约490 nm的紫外线激发后，即可观察到绿色荧光，直接、简捷、便于检测；②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响，保证了极高的检出率；③蛋白本身性质稳定；④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性；⑤其基因片段长度较小(约717 bp)，易于构建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持荧光激发活性，为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。pEGFP是一种优化的突变型GFP，使其产生的荧光较普通GFP强35倍，大大增强了其报告基因的敏感度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，并不影响其发光。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因，如上图质粒图谱所示。pEGFP-N1载体具有以下几方面特点：①从结构上看，该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是保证目的基因稳定表达的因素之一；②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达；③具有多克隆位点，便于目的基因的插入；④该载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。向左转|向右转