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回复：时间：2017-11-15
所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，通过致病力筛选，做了会更好，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉、胞外多糖分泌测定、比对获得全基因之后。第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大、致病性测定等等，所谓的敲除不外乎有三种情况，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系。通过敲除来研究基因的功能，现在正在构建互补载体；2）抗性基因双交换替换掉原基因做黄单胞，在通过Tn5构建转化子库之后：1）单交换插入抗性基因使原基因失活、Tail-PCR获得侧翼序列、生长曲线
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