免疫球蛋白纯化技术一高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体相关交流-蚂蚁淘在线

免疫球蛋白纯化技术一高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体

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实验方法原理	根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。
实验材料	PBS
试剂、试剂盒	缓冲液
仪器、耗材	层析柱高效液相色谱仪
实验步骤	1. 腹水10000g离心10min，除去细胞和杂质，在4℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使终浓度为40％饱和硫酸铵搅拌20～30min 2. 离心，沉淀用40％饱和硫酸铵洗涤2次后溶于PBS，对缓冲液A（PH8.520mMTris缓冲液）透析除盐4℃过夜 3. 用带有1000μl样品环的高压加样活门将透析后粗提物加样于经缓冲液A液平衡的TSKDEAESPW离子交换层析柱　　　　　　　　　　　　　　　　 4. 洗脱流速1ml/min 0～1min：0→5％缓冲液B（20mMTris，PH8.5，含2.0M醋酸钠） 1～20min（线性梯度洗脱）：5→20％缓冲液B 20～22min：20→0％缓冲液B 　　　　　　　　　　　　　　　　 5. 洗脱液用紫外280nm进行监测　　　　　　　　　　　　　　　　 6. 收集蛋白峰，进行含量、纯度和活性测定
注意事项	1. 所用缓冲液和加样粗提物均需0.22μm滤膜过滤。 2. 在本实验条件下，IgG1峰一般在线性梯度洗脱开始11～12min。但不同类和亚类抗体以及不同特异性McAb的存留时间（retentiontime）有所差异。