组织消化法

实验材料及试剂

①眼科弯剪、组织镊、筛网(200目)；②培养皿、培养瓶、离心管、吸管；③D-Hank缓冲液高压灭菌，4℃：保存；④胰蛋白酶或胶原酶；⑤完全培养基；⑥实验动物。

操作方法

(1)将组织块置于无菌培养皿中，用Hank缓冲液或无血清培养液漂洗，洗去血污，对于内脏组织要剥去外包膜。

(2)用眼科弯剪将组织剪成1〜2mm3左右的小块。在剪切过程中，可以适当向组织上滴加少许培养液，以保持组织块的湿润。

(3)根据组织的不同加入相应浓度的消化液，置于最佳消化条件下对组织进行消化处理。要注意在消化过程中要随时吸取少量消化液置于显微镜下观察，如组织已经分散成细胞团或单个细胞就要终止消化。

(4)将消化液过200目筛网，以去除组织块。剩余的大块组织可继续加人新鲜的消化液继续消化，以获得足量的目的细胞。

⑶将已过滤的消化液置于离心管中，离心后，加入适量的D-Hank缓冲液或培养基重悬细胞，充分打散为单个细胞悬液，洗一二次后，细胞计数，接种于培养瓶或培养皿中，置5%C02、37¾培养箱中进行培养。

注意事项

不同的器官、组织，其组织胚胎学结构不一，例如，心肌细胞或平滑肌细胞如采用剪切的方法则容易将细胞损伤，在此情况下则需采用剥离加酶消化的方法。