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2011-03-17【原创】miRNA用荧光定量PCR检测的流程以及汇总[精华]

gq2002
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回复：时间：2011-03-27

我想知道最后出来的结果怎么分析

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回复：时间：2011-03-23

学习了，谢谢楼主分享

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回复：时间：2011-03-24

lz你好我是新手，想做miRNA的QRT-PCR，您上面说如果是细胞的话，直接用Trizol提就好，请问反转录试剂盒用哪个公司比较好？文献上大多是用TaqmanmicroRNAarraykit，由于经费不多，我想用染料法，想求些好的建议。对于茎环引物一般用哪个公司设计？如果要验证七八个的话，一共下来要多少钱？问题有些傻，请别见笑>

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回复：时间：2011-03-23

lz你好我是新手，想做miRNA的QRT-PCR，您上面说如果是细胞的话，直接用Trizol提就好，请问反转录试剂盒用哪个公司比较好？文献上大多是用TaqmanmicroRNAarraykit，由于经费不多，我想用染料法，想求些好的建议。对于茎环引物一般用哪个公司设计？如果要验证七八个的话，一共下来要多少钱？问题有些傻，请别见笑>

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回复：时间：2011-03-22

学习，正准备做，谢谢楼主！

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回复：时间：2011-03-22

大家反转录试剂盒用的哪个公司的呀急需

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回复：时间：2011-03-21

大家有做miRNA转染的吗是怎么做的用的什么载体具体方法是什么

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回复：时间：2011-03-17

新手先围观一下谢谢！

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回复：时间：2011-03-18

请问提血浆microRNA和PBMCmicroRNA在逆转录之前有没有区别，如果有，是什么？其实我还是没看明白stem-loop法和poly（A）法的区别，求教！谢谢。

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回复：时间：2011-03-20

学习了，佩服楼主的耐心。

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回复：时间：2011-03-21

mark,好帖子，等我看过后跟楼主交流

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回复：时间：2011-03-19

我是提取组织的miRNA做realtimePCR，现在用trizol提取了总rna，打算采用加尾法反转录，看首页上说加尾法尽量要提取小RNA，还有，不知道Ologod(T)特异引物和Oligod(T)特异引物是打错了呢还是本来就是两种东西。

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回复：时间：2011-03-23

我现在也在做miRNA的RT-PCR，用的是polyA加尾，Taq酶探针，扩增条件是：95摄氏度5min,95度15sec,60度1min,但是扩增不出来条带，是引物的问题还是应该将扩增步骤改为三步法呢？

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回复：时间：2011-03-21

谢谢楼主

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回复：时间：2011-03-18

谢谢楼主分下你给

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回复：时间：2011-03-21

非常感谢，学习一下引物设计原则

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回复：时间：2011-03-20

楼主好~请教个问题。我也是做了miRNA芯片，挑了几个差异显著的来做验证。taqman探针和相关RT及PCR的试剂盒都是ABI的。开始是用Trizol提RNA的。预实验结果内参在22个cycle左右，第一个miRNA在18左右，但是其他几个miRNA通通在35个cycle。跟公司沟通过，认为Trizol提取RNA时miRNA损失较多。换了Qiagen的RNeasykit来提RNA。再次实验结果，内参和第一个miRNA没太大变化。有一个miRNA提前到32cycle左右。其他的还在35。实验室的师兄师姐认为cycle在35，结果的可靠性较差。希望能再把cycle提前一点，不知还有没有什么好方法。请各位不吝赐教。最近因为这个十分挠头~~~

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回复：时间：2011-03-23

东东很有用，很感兴趣，以后还要请教，先谢谢

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回复：时间：2011-03-18

LZ太强了，谢谢啦。实用哦

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回复：时间：2011-03-20

感激不尽啊，在这个帖子学到了很多很多有用的信息。谢谢

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回复：时间：2011-03-27

mark!

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回复：时间：2011-03-18

顶谢谢

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回复：时间：2011-03-24

好好学习中

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回复：时间：2011-03-27

谢谢，分享

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回复：时间：2011-03-28

LZ，你在RNA提取中提到的。血液和植物样本需要前期处理后再用Trizol＋氯仿或用专门的Kit抽提。要如何前期处理？

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回复：时间：2011-03-28

谢谢楼主分享

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回复：时间：2011-03-26

受益匪浅！

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回复：时间：2011-03-20

自己最近也在做,做的有点不好，像大家学习了

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回复：时间：2011-03-23

最近在做血浆miRNA检测。目前想先设计合成茎环结构引物，用sybgreen方法检验一下引物的好坏。到正式实验时，再订制探针做。存在的疑问就是：国内有几家公司，比如上海闪晶和上海基康，都可以合成MGB探针，考虑到价格和时间问题，ABI的货期太长，而且很贵，我想选择国内的探针做做。不知道大家伙有没有人试过国内的MGB探针，效果好坏与否都来说说啊。。。谢谢！

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回复：时间：2011-03-28

不错，谢谢楼主，学习一下！

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回复：时间：2011-03-23

好东西，收藏

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回复：时间：2011-03-23

经过我个人的经验来看，推荐做miRNA的童鞋都采用茎环引物来反转，跟试剂盒比起来贵不了多少点点钱滴，至少不会被某些不良商家用特异性下游引物要挟啊

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