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回复:时间:2011-03-24
lz你好我是新手,想做miRNA的QRT-PCR,您上面说如果是细胞的话,直接用Trizol提就好,请问反转录试剂盒用哪个公司比较好?文献上大多是用TaqmanmicroRNAarraykit,由于经费不多,我想用染料法,想求些好的建议。对于茎环引物一般用哪个公司设计?如果要验证七八个的话,一共下来要多少钱?问题有些傻,请别见笑>
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回复:时间:2011-03-23
lz你好我是新手,想做miRNA的QRT-PCR,您上面说如果是细胞的话,直接用Trizol提就好,请问反转录试剂盒用哪个公司比较好?文献上大多是用TaqmanmicroRNAarraykit,由于经费不多,我想用染料法,想求些好的建议。对于茎环引物一般用哪个公司设计?如果要验证七八个的话,一共下来要多少钱?问题有些傻,请别见笑>
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回复:时间:2011-03-18
请问提血浆microRNA和PBMCmicroRNA在逆转录之前有没有区别,如果有,是什么?其实我还是没看明白stem-loop法和poly(A)法的区别,求教!谢谢。
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回复:时间:2011-03-19
我是提取组织的miRNA做realtimePCR,现在用trizol提取了总rna,打算采用加尾法反转录,看首页上说加尾法尽量要提取小RNA,还有,不知道Ologod(T)特异引物和Oligod(T)特异引物是打错了呢还是本来就是两种东西。
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回复:时间:2011-03-23
我现在也在做miRNA的RT-PCR,用的是polyA加尾,Taq酶探针,扩增条件是:95摄氏度5min,95度15sec,60度1min,但是扩增不出来条带,是引物的问题还是应该将扩增步骤改为三步法呢?
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回复:时间:2011-03-20
楼主好~请教个问题。我也是做了miRNA芯片,挑了几个差异显著的来做验证。taqman探针和相关RT及PCR的试剂盒都是ABI的。开始是用Trizol提RNA的。预实验结果内参在22个cycle左右,第一个miRNA在18左右,但是其他几个miRNA通通在35个cycle。跟公司沟通过,认为Trizol提取RNA时miRNA损失较多。换了Qiagen的RNeasykit来提RNA。再次实验结果,内参和第一个miRNA没太大变化。有一个miRNA提前到32cycle左右。其他的还在35。实验室的师兄师姐认为cycle在35,结果的可靠性较差。希望能再把cycle提前一点,不知还有没有什么好方法。请各位不吝赐教。最近因为这个十分挠头~~~
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回复:时间:2011-03-23
最近在做血浆miRNA检测。目前想先设计合成茎环结构引物,用sybgreen方法检验一下引物的好坏。到正式实验时,再订制探针做。存在的疑问就是:国内有几家公司,比如上海闪晶和上海基康,都可以合成MGB探针,考虑到价格和时间问题,ABI的货期太长,而且很贵,我想选择国内的探针做做。不知道大家伙有没有人试过国内的MGB探针,效果好坏与否都来说说啊。。。谢谢!
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