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回复：时间：2011-03-24
lz你好我是新手，想做miRNA的QRT-PCR，您上面说如果是细胞的话，直接用Trizol提就好，请问反转录试剂盒用哪个公司比较好？文献上大多是用TaqmanmicroRNAarraykit，由于经费不多，我想用染料法，想求些好的建议。对于茎环引物一般用哪个公司设计？如果要验证七八个的话，一共下来要多少钱？问题有些傻，请别见笑>
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回复：时间：2011-03-23
lz你好我是新手，想做miRNA的QRT-PCR，您上面说如果是细胞的话，直接用Trizol提就好，请问反转录试剂盒用哪个公司比较好？文献上大多是用TaqmanmicroRNAarraykit，由于经费不多，我想用染料法，想求些好的建议。对于茎环引物一般用哪个公司设计？如果要验证七八个的话，一共下来要多少钱？问题有些傻，请别见笑>
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回复：时间：2011-03-18
请问提血浆microRNA和PBMCmicroRNA在逆转录之前有没有区别，如果有，是什么？其实我还是没看明白stem-loop法和poly（A）法的区别，求教！谢谢。
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回复：时间：2011-03-19
我是提取组织的miRNA做realtimePCR，现在用trizol提取了总rna，打算采用加尾法反转录，看首页上说加尾法尽量要提取小RNA，还有，不知道Ologod(T)特异引物和Oligod(T)特异引物是打错了呢还是本来就是两种东西。
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回复：时间：2011-03-23
我现在也在做miRNA的RT-PCR，用的是polyA加尾，Taq酶探针，扩增条件是：95摄氏度5min,95度15sec,60度1min,但是扩增不出来条带，是引物的问题还是应该将扩增步骤改为三步法呢？
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回复：时间：2011-03-20
楼主好~请教个问题。我也是做了miRNA芯片，挑了几个差异显著的来做验证。taqman探针和相关RT及PCR的试剂盒都是ABI的。开始是用Trizol提RNA的。预实验结果内参在22个cycle左右，第一个miRNA在18左右，但是其他几个miRNA通通在35个cycle。跟公司沟通过，认为Trizol提取RNA时miRNA损失较多。换了Qiagen的RNeasykit来提RNA。再次实验结果，内参和第一个miRNA没太大变化。有一个miRNA提前到32cycle左右。其他的还在35。实验室的师兄师姐认为cycle在35，结果的可靠性较差。希望能再把cycle提前一点，不知还有没有什么好方法。请各位不吝赐教。最近因为这个十分挠头~~~
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回复：时间：2011-03-23
最近在做血浆miRNA检测。目前想先设计合成茎环结构引物，用sybgreen方法检验一下引物的好坏。到正式实验时，再订制探针做。存在的疑问就是：国内有几家公司，比如上海闪晶和上海基康，都可以合成MGB探针，考虑到价格和时间问题，ABI的货期太长，而且很贵，我想选择国内的探针做做。不知道大家伙有没有人试过国内的MGB探针，效果好坏与否都来说说啊。。。谢谢！
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