1.服务简介

      microRNA是一类大小约为22个碱基的小RNA分子。它们在转录后阶段对基因表达进行调控。调控机制是通过与靶基因的mRNA互补序列结合，抑制蛋白质的翻译或降低mRNA的稳定性，从而抑制靶基因的表达。microRNA在细胞的发育，分化，生长等生命活动中起着重要调控作用。
     
     Acebiox采用第三代SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法对您感兴趣的miRNA进行相对定量。客户只需提供样品，我们即可提供基因表达定量结果。
     
第三代miRNA定量检测技术

       miRNA由于自身结构较为特殊，片段长度较短（约为22个碱基），无法直接应用PCR技术进行扩增。针对该特性，必须要延伸目标miRNA的长度，构建一个足够长的PCR模板。目前使用较多的方法为PolyA加尾法和通用型茎环引物法。加尾法可以检测到成熟miRNA及pre-miRNA，特异性稍低；茎环法只针对成熟miRNA，特异性相对较高。
      但是目前越来越多的实验发现，在检测目的miRNA时，通用型茎环引物并不适用于所有miRNA，并且在加入无模板中反应后，会发现实验本地过高，造成一定的实验误差。
      Acebiox通过持续的研发工作，已升级到第三代miRNA检测方法——即为每个miRNA都设计专门的反转录茎环引物，大大增强检测效果。我们的miRNAPCR芯片采用SYBRGreenI实时荧光PCR进行准确定量，并根据不同miRNA的功能特性，研发出专题应用的miRNAPCR芯片。在Acebiox独特的体系设计下，使得所有miRNA可以在统一的条件下高效扩增。

 


主要特点：
1.为每个miRNA都设计专门的反转录茎环引物，解决了一种通用的茎环引物难以匹配所有miRNA的问题，以及miRNA分析相互干忧的问题，并且极大程度降低本底，提高准确性；
2.优化反应条件，大大缩短检测时间，约1个小时即可在Roche480II上完成实验检测；
3.提高检测灵敏度，线性范围高达10⁶，应用低至50ngexosome提取的总RNA，也能得到较好的实验结果！


2.接受样品类型

a)   组织样品（需提供≥100mg组织。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中）；
b)   体外培养细胞（需提供≥10^6个细胞。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中）；
c)   全血（需提供≥2ml全血）；
d)   总RNA（需提供≥5ugtotalRNA）；
e)   其他样品，请来电或邮件咨询。
 
     所有类型样品必须用冰袋或干冰寄至公司。冰袋或干冰应足量，以确保样品寄至公司时，冰袋或干冰未完全融化。使用invitrogen品牌TRIzol试剂，按以上指导方法邮寄样品，3天内不会影响RNA质量。

 


3.服务内容

①   引物设计与合成             由Acebiox提供实验所需引物；
②   RNA抽提纯化                在组织或细胞样品中加入TRIzol试剂（invitrogen），匀浆或裂解后抽提RNA；
③   基因组DNA消化处理      使用DNA消化液消化基因组残余DNA，最大程度降低实验干扰；
④   RNA质量检测                  使用DenovixDS-11超微量分光光度计测定样本RNA浓度和纯度；
⑤   cDNA合成                      将mRNA反转录为cDNA；
⑥   实时荧光定量PCR检测     加入cDNA和反应液，在Roche480Ⅱ中进行扩增和检测；
⑦   提交实验数据和报告        服务报告提交下列数据：实时荧光定量PCR扩增曲线；熔解曲线；基因表达定量结果分析，图表等。

4.服务价格
 

服务名称	具体内容	价格
miRNA实时荧光定量PCR检测	提供实时荧光定量PCR扩增曲线，熔解曲线，分析报告等	45元/孔位

 

5.服务报告提交时间

     收到样品后10-15个工作日。


6.服务咨询
     
      查询详细信息请点击 http://acebiox.cn/mirna_quantification_service.html

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