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回复:时间:2018-01-27
直接竞争ELISA和间接竞争ELISA区别 1、直接竞争,标记抗原,与检测样品中的抗原竞争抗体。 2、间接竞争,标记抗体,固相抗原与液相抗原(样品)竞争标记抗体。 3、定义 间接竞争法的模型:包被抗原,用HRP-抗体与样本一起加入。样本中的Ag与Solid-Ag竞争HRP-Ab,固相吸附的HRP-Ab与样本中的Ag浓度成反比。 直接竞争法的模型:包被抗体,用HRP-抗原与样本一起加入。样本中的Ag与HRP-Ag竞争Solid-Ab,固相吸附的HRP-Ag与样本中的Ag浓度成反比。 4、竞争法的理论基础:是限量抗体。只有在限量抗体基础上,两种抗原才会形成竞争关系。 5、、间接竞争法具备较高灵敏度原因。 直接竞争法里,标记抗原与待测抗原均是液相,与抗体的结合机会是一样的,例如有1份标记抗原与1份待测抗原竞争1份抗体,那么有50%的标记抗原能与抗体结合,所以标记抗原的相对结合率为50%。间接法里,固相抗原与抗体的接触面积较小,固相抗原与待测抗原的结合抗体机会是不平等的,接近顺序饱和法,即只有与待测抗原结合剩余的抗体才会与固相抗原结合,同样有1份固相抗原与1份待测抗原竞争1份抗体时,基本上抗体会被待测抗原中和掉,与固相抗原结合的抗体非常少。固相抗原的相对结合率为0%。因此,间接法的抑制曲线斜率会大于竞争法。 因为抑制率越大则斜率越大,从而灵敏度越大。(假设零管变异5%,以两倍SD为灵敏度限,则为90%相对结合率,则间接法可以在较低的待测抗原浓度达到这一相对结合率,因此灵敏度要高。) 在进行系统放大时,间接法一般可以使用酶标二抗。因为二抗可以针对抗体的多个部位,所以存在放大效应,从而能提高间接法的灵敏度。直接法一般难以进行放大,常用的有生物 素化抗原与酶标亲和素,但模式上似乎不存在放大效应。 6、间接法的高灵敏度难以实现的原因: 双抗体 夹心的免放(IRMA)模式刚出现时,也被模型证明灵敏度优于竞争法的放免(RIA),原因也是较大的斜率,但是IRMA的高灵敏度一直到单抗发展后才得以实现。
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回复:时间:2018-01-20
直接竞争ELISA和间接竞争ELISA区别:1、直接竞争,标记抗原,与检测样品中的抗原竞争抗体。2、间接竞争,标记抗体,固相抗原与液相抗原(样品)竞争标记抗体。
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