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用Mabteck公司的ALP标记抗体吧,配合Millipore公司的Multiscreen-IP96孔板,所有的试剂都可以减半,照样可以出非常好的结果,4*96孔的试剂盒我一直做8*96孔,但BCIP/NBT显色液没试过减半,因为它很便宜。记得当年第一次做实验就出了很好的结果,经过不断摸索,做出的蓝紫色斑点确实非常漂亮,几乎没有非特异斑点,嗯,ELISPOT是我最拿手的实验之一。
关于PBMC:
拿到血液标本后,首先我要做的是尽快分离PBMC(一般2h内),国产的分离液里天津灏洋的比较好,然后用冻存液冻存PBMC。PBMC的冻存过程比一般的细胞株要更为严格,最好用冻存器。ELISPOT试验的第一天,在包被抗体的同时,将细胞复苏,完全培养液培养过夜,第二天收集细胞并计数即可。
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回复:时间:2013-05-17
所测物质没有现成的试剂盒怎么办?自己包被的话有之前用于检测该物质的ELISA试剂可以通用吗?(要测的是特异性某蛋白抗体做过的elisa是蛋白包被血清结合后洗涤加hrp包机的二抗再加tmb显色)非常感谢!
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