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溶血空斑实验一小室液相法
蚂蚁淘
/发布时间:1533244793 /浏览量:143
| 实验方法原理 | 溶血空斑试验，又称空斑形成细胞（PlagueFormingCell,PFC）试验，是一种体外检测抗体形成细胞的方法。将一定量洗涤过的绵羊红细胞注射入小鼠腹腔，四天后将小鼠杀死，取脾脏制成脾细胞悬液，内含抗体形成细胞。然后将脾细胞、绵羊红细胞，补体混合孵育。由于PFC所分泌的抗体和绵羊红血球结合形成抗原抗体复合物，在补体作用下可使红细胞溶解，于特制的小室内形成肉眼可见的溶血空斑。一个空斑即代表一个抗体形成细胞。 | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | ICR小鼠 试剂、试剂盒 | 绵羊红血球补体 仪器、耗材 | 解剖器械试管吸量管载玻片石蜡盘酒精灯微量加样器
实验步骤 | 1. 小鼠免疫及脾细胞悬液的制备 将5％SRBC0.4ml注射于小鼠腹腔，4天后拉脱颈椎处死，取出脾脏放在已加入6mlHank"s液的平皿中。在100目不锈钢网上研磨，过滤混匀，从中吸取1ml加入试管中，加满Hank"s液混匀，离心1000rpm，10分钟。将沉淀的脾细胞恢复1ml容积，即为约1×107 /ml浓度的细胞悬液。 2. 制作小室 取无脂载玻片（75mm×25mm）,平置桌面上。用双面胶带在载玻片两端和中间各粘一条，然后再覆盖上同样的载玻片，即形成两个小室。将此双层玻片的一侧长边浸入融化的石腊池中以封闭小室的一边（无需浸入过深，以能封闭小室边缘为准）。 3. 小室灌注细胞悬液 取1×107 /ml脾细胞悬液100μl 10％SRBC200μl 新配补体200μl Hank"s液1ml 混匀后，用尖吸管灌注小室、蜡封、标记、平放于玻片盘内，置37℃孵箱30—45分钟。 注意事项 | 1. 小室注入液体时不要留有气泡。 2. 小室边缘需用石蜡封严。 3. 37℃孵箱孵育时，必须放平，不可倾斜。 4. 观察结果时，应注意辨别空斑与气泡的区别，避免将气泡误认为溶血空斑。  其他 | 一、实验结果 观察小室内的透明空斑，一个空斑即代表一个空斑形成细胞（PFC），即B细胞。
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