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回复:时间:2018-01-17
盐析,中性盐使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。eg.硫酸铵 有机溶剂沉淀,极性有机溶剂降低介点常数使蛋白质凝集沉淀。eg.甲醇、乙醇、丙酮。磺基水杨酸也可以沉淀蛋白质,但要加酸调节ph,使之低于血清蛋白的pi,使蛋白质带正电荷,与水杨酸酸根结合生成不溶盐而沉淀。血清蛋白质均带负电荷,但各种蛋白质带负电荷的程度有所差异,以白蛋白为最多。而血清白蛋白等电点为4.7-4.9。所以把ph调到4.7以下就可以了。
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回复:时间:2018-01-13
取新鲜血清2ml,加入等量PBS和饱和硫酸铵溶液,混匀后静止30min,3000rpm离心10min,沉淀物即是γ?球蛋白。该步骤可重复1?2次,以保证纯度。将γ?球蛋白通过SephadexG?25层析作用,用PBS洗脱,除去蛋白质中的小分子铵盐,从而达到γ?球蛋白纯化的目的。洗脱下来的收集液可以用磺基水杨酸检测蛋白质的存在,用奈氏试剂检测是否除净NH4+,然后把含有γ?球蛋白的样品合并收集。用磺基水杨酸沉淀蛋白质产生化学反应啦,蛋白质里面含的成份是钙,水杨酸里面喊有CO3离子,两者结合行成CACO3为白色沉淀物从而达到去处血清中的蛋白的目的
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