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2021-08-08【求助】纯化蛋白制作血清

catzp
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各位大虾，我想问春花出来的蛋白如果用来打兔子制作一抗，那么变性纯化的蛋白用不用复性？我的蛋白是用Ni柱纯化，其中含有尿素和咪唑，这些用不用除去在进行注射呢？
谢谢各位
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相关回复

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回复：时间：2021-08-08

纯化的蛋白最好做过透析，去除掉里面富含的盐离子，及一些小分子杂质，减少对受体动物的伤害，所用的免疫原蛋白最好是有生物活性的，但有报道也直接用变性的蛋白打出了抗体，将纯化的蛋白与佐剂体积1：1混匀完全乳化至油包水状态，皮下多点以0.1-0.5mg/kg的量免疫兔子，两到三周后免疫第二次，以后每两周免疫一次，期间采血检测抗体效价！

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回复：时间：2021-08-11

小分子可以不用去除，特别是一些动物本身的代谢产物，曾经用8M的尿素保存的蛋白，一样直接打，兔子没什么问题如果蛋白溶液里面含有毒性的物质最好考虑去除，比如叠氮钠，巯基乙醇，SDS等

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