血清纯化蛋白

2021-08-04【求助】牛血清培养CHO细胞外泌表达的蛋白如何纯化?

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我目前正在做一种牛血清培养CHO细胞外泌表达的蛋白纯化,可是,再上了离子交换柱后,再上亲和层析,发现目的蛋白与杂蛋白都吸附上了,通过电泳结果,杂蛋白主要来自于培养用的牛血清中,如此复杂的工作如何进行?如果用无血清培养细胞,表达方面是否受到影响?请高手指点。
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回复:时间:2021-08-15

不知道为什么不先上亲和柱。杂蛋白是和目标蛋白间结合,还是和柱子结合?如果是非特异吸附,加点glycerol, tween等应该会有帮助,可以做个对照实验。血清成分复杂,一般还是先亲和,然后再用IEX和HIC精纯。SFM的培养基可能会影响表达,对于细胞,突然换条件都会有影响,如果杂带后面很难除去,那么SFM的驯化就是必需的了,做成了,成本也会低。