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2021-08-12【求助】高手指点：为何抗血清纯化抗体时出现蛋白沉淀

bt20001_ren
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家兔免疫我用的是Histag的重组蛋白
纯化时准备用GSTtag的重组蛋白，蛋白是一样的
以前实验室也有人做过

前面的表达、纯化和透析的时候都好好的
当我把透析好的蛋白跟处理过的CNBr活化的Sepharose4B混合4度旋转过夜后，第二天下午就发现有沉淀。拿沉淀跑了胶，就是我得重组蛋白
另外，透析和过夜是我用的溶液都是纯化时用的PH8.3的结合缓冲液

不知道是什么原因。为什么好好的蛋白一跟Sepharose旋转过夜就会有沉淀呢
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相关回复

已帮助 0人

回复：时间：2006-07-17

降低温度,缓冲液的ph值会变化,若蛋白对ph影响较大,则蛋白的局部可能凝集沉淀

有用（0）

已帮助 0人

回复：时间：2006-07-22

问题是透析时用的同样的缓冲液啊，也放4度了，没沉淀是不是加了Sepharose以后旋转过夜时间不能太长啊

有用（0）
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