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请教各位高手：
1.本人最近用权威文献中的引物PCR，使用前在NCBI上BLAST了一下，可是并没有结果。这个引物可用吗？
2.自己用OLIGO7设计了一对引物，评分良好，BLAST特异性好。可是实际一直P出某条非目的条带。退火温度也按TM值调节过了。实在想不出什么原因。
3.使用NCBI上的PRIMER-BLAST设计的引物，在NCBI自己的BLAST却找不到目的片段，这是为啥？引物可用吗？
谢谢！
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