2017-08-25逆转录时到底需不需要引物。

做题时候说是要

以课本为准啊书上没写应该是不用的

书上写了要

好复杂的感觉

要。合成的是DNA

需要引物。我笔记上写的是病毒tRNA中含有引物，具体原因忘啦。逆转录酶又叫依赖RNA的DNA聚合酶，~~既然是DNA聚合酶，那么生成DNA就得需要引物吧。

生成dna的，需要

seuzsl我没有做过血浆中miR楼主，刚设计遇到麻烦，miR引物序列为：GGUGGCCCGGCCGUGCCUGAGG；由于GC含量太高，无法使Tm值降至60左右，加AT好像要加很多很多，有没有更好的办法？

楼主您好：1、谢谢楼主能做设计出这么好的软件来2、新人学习，我不太明白您的反转录特异引物是在某篇文献中找的，还是。。。因为我从别的文献中看到过其他的特异性引物。。3、特异性引物是什么动物都可以用么？？还是每种动物都有不同的特异性引物？我做的是小鼠骨骼肌的MIRNA

好东西

正需要这样的资料

刚需，谢谢！

楼主你好！你这个帖子的茎环序列，我在你其他帖子中也看到了，想必你们实验室用该序列效果是挺好的了。请问你用该茎环做的是什么物种？

人，其它物种也可以使用，与物种无关

好东西，谢谢

楼主，我想请问下，你的这个茎环序列是怎么确定的呢。你的这个反转录用的内参是哪个，U6吗？GAPDH可以用吗？因为是新手，所以好多问题都不太清楚。

jandrea楼主，我想请问下，你的这个茎环序列是怎么确定的呢。你的这个反转录用的内参是哪个，U6吗？GAPDH可以用吗？因为是新手，所以好多问题都不太清楚。序列是文献报道的，当然你也可以自己设计可以用U6。GAPDH是mRNA的内参

谢谢，楼主，内参U6的引物需要怎么设计

lbcaihong谢谢，楼主，内参U6的引物需要怎么设计文献中找现成的，无需设计

seuzsl文献中找现成的，无需设计能提供一篇文献吗?O(∩_∩)O谢谢

maomao0_0能提供一篇文献吗?O(∩_∩)O谢谢太多了，自己去PubMed找

最近设计引物，用到楼主的小软件，很方便，赞一个！想请教一个问题。由于miRNA序列的特异性，为避免引物二聚体的ΔG过大，茎环尾加长度需要设为9。请问，你有没有使用过这么长的茎环尾加长度？你估计这样设计行得通不？

绿色的地球最近设计引物，用到楼主的小软件，很方便，赞一个！想请教一个问题。由于miRNA序列的特异性，为避免引物二聚体的ΔG过大，茎环尾加长度需要设为9。请问，你有没有使用过这么长的茎环尾加长度？你估计这样设计行得通不？一般尾部加8个，9个也可以

帖子已被删除1、比如miRNA序列中连续的CCC比较多，那么你就不能再在5‘端增加GGG，而是增加CCC；你增加CG后如果有发卡结构，软件也会提示的2、可以加，只能在5’端加3、主要看TM值，两个引物接近为主但是有时候难以设计出非常理想的引物，即使primer3.0提示引物存在问题，照样可以扩增的

展开引用seuzsl1、比如miRNA序列中连续的CCC比较多，那么你就不能再在5‘端增加GGG，而是增加CCC；你增加CG后如果有发卡结构，软件也会提示的2、可以加，只能在5’端加3、主要看TM值，两个引物接近为主但是有时候难以设计出非常理想的引物，即使primer3.0提示引物存在问题，照样可以扩增的......非常感谢您的回复，神速啊，你的回复很有用，已经摸索一个多月了效果还是不好，有两个目的基因扩增不出来，主要原因可能还是血浆miR浓度太低，不知楼主有没有做过血浆的miR定量，有没有好的指导方法？跪谢~

huangzi1127非常感谢您的回复，神速啊，你的回复很有用，已经摸索一个多月了效果还是不好，有两个目的基因扩增不出来，主要原因可能还是血浆miR浓度太低，不知楼主有没有做过血浆的miR定量，有没有好的指导方法？跪谢~我没有做过血浆中miR

seuzsl我没有做过血浆中miR楼主，刚设计遇到麻烦，miR引物序列为：GGUGGCCCGGCCGUGCCUGAGG；由于GC含量太高，无法使Tm值降至60左右，加AT好像要加很多很多，有没有更好的办法？

seuzsl可以好的，多谢，我试试

楼主你好，正在学习你的经验，想请问你的通用下游引物是怎样确定的，看不懂，谢谢啦

yyl蝶恋花楼主你好，正在学习你的经验，想请问你的通用下游引物是怎样确定的，看不懂，谢谢啦是设计这个茎环的人设计的

嗯，懂了，可是按这些输入进去出现这种结果是怎么回事呢？谢谢！

展开引用yyl蝶恋花嗯，懂了，可是按这些输入进去出现这种结果是怎么回事呢？谢谢！......序列没有输对你把输入的模板序列及引物序列的截图发一个

展开引用yyl蝶恋花嗯......茎环序列明显跟我的不同，当然不能用我给出的通用引物

那这个通用下游引物需要怎样设计呢

yyl蝶恋花那这个通用下游引物需要怎样设计呢你想多了，茎环序列和通用下游引物直接拿来用就可以，用成熟的序列即可，别自己设计，除非你认为自己很牛掰