DNA限止性内切酶克化注意事情要点

1.凡用在酶切反响中的一切分子化合物塑料盛器（Eppendorf管,Tip头等）,真空干燥箱都要新的,zui终用重蒸水清洗,湿热灭菌,置50℃温箱中烘焙,运用前敞开包装,用小镊子夹取,不直接用手去拿,严密防备手里杂酶污染。

2.分子克隆是微量操作技术,DNA样品与限止性内切酶的用量都,务必严明注意吸样量的正确性及所有放入反响整体体系中电热恒温培养箱。

3.要注意酶切时加样的次第,普通次第为水、缓和冲突液、DNA各项试药,zui终才加酶液。取液时,Tip头要从溶液外表汲取,以避免Tip头沾去过多的液体与酶,待用的内切酶要放在冰浴内,用后盖紧盖子,迅即放回-20℃冰箱,避免限止性内切酶的失活培养箱。

4.当样品在37℃与65℃保暖时,要注意:

（l）避免因盖子未盖严紧使水汽进入了管内,使反响溶液大小数量多增加,导致实验败绩。

（2）避免因为标签剥离,分不zui后校样种类型。

5.因为温差端由,往往在盖上有水汽,因为这个样品酶切完结或半中腰抽样电泳要离心2秒钟,以集中大小内溶液,否则会发觉酶切后大小少了。