2021-07-27【求助】请问有什么方法可以检测RNA聚合酶Ⅱ、RNaseⅢ、Dicer酶含量和活性？

For RNA polymerase II, try to download the attached files. After you have experiences in RNA polymerase II project, you may be able to design and test RNA polymerase III and Dicer. Anyway, I will try to find those published papers for RNA polymerase III and Dicer.2950.pdf(945.74k)B091065_2485.pdf(766.99k)

Trytodownloadtheattachedfile.ThepaperdescribeshowtodetermineRNApolymeraseIIIactivity.borchert-micro-rna-pol3-2006.pdf(313.63k)

Trytodownloadtheattachedfiles.ThetwopublishedpapersdescribethebasicofDiceractivity.PNAS-2008-MacRae-512-7.pdf(1783.82k)journal.pbio.0030235.pdf(554.95k)

非常感谢哦，我仔细研读研读！

老师，您好。我现在在写毕业论文。遇到一个难题。看到您发的关于RNA的帖子，想向您请教。我的毕业论文是利用高容量血液滤过（HVHF）治疗多器官功能障碍综合征犬（MODS犬）。监测指标是：一般生命体征、心脏超声、血生化、动脉血气分析，治疗结束后心肺肝肾的组织病理学变化，RT-PCR法测JNK2mRNA在心肺肝肾的定量结果。实验结果是，治疗组的JNK2mRN在肺脏、肝脏中的表达水平低于MODS组。导师的意思是让我从细胞凋亡角度探讨HVHF治疗对JNK介导的细胞凋亡的影响，解释HVHF对MODS犬可能的治疗机制。根据我看到的文献，我只能解释缺血再灌注损伤、LPS、炎症可以引起JNK激活导致JNK信号通路激活，向下传导引起细胞凋亡。HVHF治疗可以减轻器官损害，是因为减轻了细胞凋亡，减少了JNK的激活，但是我不能解释为什么HVHF治疗可以使JNK2mRNA定量水平降低呢？老师十分冒昧给您写个这条信息，并且赘述这么多，请您能抽出时间给予指导或者推荐参考资料，不胜感激！

实话实说，我对您的研究领域并不熟悉，但根据您的叙述和有关内容对您的问题尝试进行解答如下：如果您可以并已经证明了：“HVHF治疗可以减轻器官损害，是因为减轻了细胞凋亡，减少了JNK的激活”的话，因为JNK的激活是指其自身发生特异性位点的磷酸化，因此可能您所检测的JUN2mRNA的水平从某种程度上代表了（或按比例代表了）磷酸化（即激活的）JNK的量，使您得到了JNK2mRNA水平降低的结果。从理论上讲，mRNA检测结果反映不出来磷酸化蛋白的量，因此如果您按照上述的假设来“讲故事”的话，还需要从其他方面进行补充，比如：第一，证实mRNA的检测方法可以在你的实验条件下呈线性反映磷酸化JNK2的量（或者说实验条件下总的JNK2表达量和磷酸化后的JNK2量的比例保持不变）；或者第二，收集两组实验的组织切片，进行总JNK2和磷酸化后JNK2特异性抗体的染色，然后成像进行分析（不一定定量，只是说明治疗后JNK激活的水平下降了）。第一项措施针对你目前的状态数据进行“修补”，你自己可以根据现有其他的文献进行对JNK2的“预测”（即说明你所使用的实验条件下，总的JNK2的量和磷酸化JNK2的量维持一定的比例，至于为什么，你可以自己提出模型）。第二项措施将会提高你的论文水平，虽然实施起来可能有一些难度。因为mRNA本身毕竟不是蛋白质，因此我们可以通过mRNA来“讲故事”，但其说服性“低很多”。如果你能提供蛋白水平上治疗组和对照组的区别，当然你的文章说服力增加，证据的水平提高。（如果你有足够的组织切片，还可以结合来进行TUNEL的染色，比较治疗组和对照组的apoptosis情况）。具体情况包括组织特征等需酌情处理，以上建议仅供参考。

DNA-sensingsystems目前做得很好的是东京大学谷口维绍教授的实验室，通过以下论文可以对这个领域有一个大致的了解：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18280611?dopt=AbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17618271?dopt=AbstractPlushttp://www.pnas.org/content/105/14/5477.long