保存日期：本试剂盒自订购之日起6月内有效。
 
操作流程:
一、样本前处理：
1.血清（浆）：可直接取样用于测定（个别含量过高的样本需要稀释后测定，如鸡血清（浆）中ALP活力较高，一般需要用生理盐水5倍或10倍稀释后待测）。
2.组织：准确称取待测组织的重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水进行匀浆，2500rpm，离心10min，取上清液进行测定。
3.细胞培养液：吸取细胞培养液，1000-1500rpm，离心10min，取上清液进行测定。
4.培养细胞：
a.培养细胞的收集：
悬浮培养细胞：可直接通过离心收集沉淀细胞（1000rpm，离心10min，弃上清留沉淀细胞）。
贴壁培养的细胞：吸去上清，可通过细胞刮直接将细胞刮下，然后1000rpm，离心10min弃上清，留沉淀细胞，再加入1mlPBS轻轻吹打，再次1000rpm，离心10min弃上清，留沉淀细胞待用。
b.培养细胞的破碎：在细胞沉淀中加入一定量（108的细胞一般加0.3-0.5ml）的缓冲液（缓冲液可以用PBS或者是生理盐水），需保证超声探头在液面以下。功率300W，冰水浴，每3-5s超声一次，间隔4次（每次间隔时间为30s左右）

二、测定过程参考操作表如下：

试剂名称	空白孔	标准孔	测定孔
双蒸水（μl）	5
0.1mg/ml酚标准工作液（μl）		5
待测样本（μl）			5
缓冲液（μl）	50	50	50
基质液（μl）	50	50	50

充分混匀，37℃水浴，15min

显色剂（μl）

150

150

150

轻轻振摇孔板混匀，波长520nm，酶标仪测定各孔吸光度OD值。

三、计算公式
1.血清（浆）中ALP活力计算公式：
单位定义：100ml血清在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
血清中ALP活力（金氏单位/100ml）=测定OD值-空白OD值/标准OD值-空白OD值x酚标准品浓度（0.1mg/ml）x100mlx样本测定前稀释倍数
2.组织样本中ALP活力计算公式：
单位定义：每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
组织中ALP活力（金氏单位/gprot）=测定OD值-空白OD值/标准OD值-空白OD值x酚标准品浓度（0.1mg/ml）÷待测样本蛋白浓度（gprot/ml）
3.培养液中ALP活力计算公式：
单位定义：100ml液体在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
培养液中ALP活力（金氏单位/100ml）=测定OD值-空白OD值/标准OD值-空白OD值x酚标准品浓度（0.02mg/ml）x100mlx样本测定前稀释倍数
4.培养细胞ALP活力计算公式：
单位定义：每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位
培养细胞中ALP活力（金氏单位/gprot）=测定OD值-空白OD值/标准OD值-空白OD值x酚标准品浓度（0.02mg/ml）÷待测样本蛋白浓度（gprot/ml）
 
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温馨提示：不可用于临床治疗。