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我跑了30多个基因，大约30个下降，这个药物之前报道过有RNA聚合酶抑制
但是减少20倍的mRNA,跑蛋白，蛋白水平无明显变化，买了3个抗体，3个抗体都这样，PCR结果应该是准确的，换了3批样品，重复3次，都是一样的趋势，这种情况能解释吗？
谢谢各位。
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回复：时间：2015-05-20
How did you determine test gene mRNA levels? After 20 folds down, are levels of test gene mRNA sustained? Have you tried immunoprecipitation with S35 tagged proteins prepared from testing cells?
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回复：时间：2015-05-21
mparkHowdidyoudeterminetestgenemRNAlevels?After20foldsdown,arelevelsoftestgenemRNAsustained?HaveyoutriedimmunoprecipitationwithS35taggedproteinspreparedfromtestingcells?是用q-PCR,Trizol提取法。机器是Bio-Rad的，20倍下降是给药最高浓度，用的2^(-△△CT)算法，24h，之后的时间点都没做，时间再长细胞毒性就比较显著了，细胞会皱缩减少。S35标记蛋白没有试过，实验室没有条件做放射性试验，是说像Alexa488这样的标记蛋白观察蛋白分布的变化吗、谢谢老师
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回复：时间：2015-05-30
S35-methioninewillbeincorporatedintopeptideswhenproteinsynthesistakesplaceinsidecells.ByimmunoprecipitationwithantibodyagainstproteintestedinthecellwhichhasbeentreatedwiththeRNApolymeraseinhibitor.Inthiswayyoucanevaluatelevelsoftestedproteinsynthesis.
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回复：时间：2015-05-19
ItisnotalwaystruethatdownregulationofmRNAwouldleadtodeclinedlevelsofprotein.ItcouldstimulateproteinsynthesisbydownregulatingmRNAviainhibitionofRNApolymerase.
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回复：时间：2015-05-22
mparkItisnotalwaystruethatdownregulationofmRNAwouldleadtodeclinedlevelsofprotein.ItcouldstimulateproteinsynthesisbydownregulatingmRNAviainhibitionofRNApolymerase.谢谢老师，S35实验室条件可能做不了，我继续查一下有没有RNA聚合酶被抑制使mRNA下降但蛋白合成不影响的情况，多谢老师
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