货号：	20427ES80
供应商：	上海翊圣生物科技有限公司
英文名：	AlkalinePhosphatase(30U/μl),CalfIntestine(CIAP)
保存条件：	-20℃
规格：	1000U

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
AlkalinePhosphatase(30U/μl),CalfIntestine(CIAP)小牛肠碱性磷酸酶	20427ES80	1000U	-20℃	936.00

产品描述
  AlkalinePhosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
  本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
产品组分

组分编号	组分名称	规格
20427-A	AlkalinePhosphatase(30U/μl)	1000U
20427-B	10×APbuffer	1ml

产品性质

来源（Source）	携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制（QualityControl）	无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活（ThermalInactivation）	在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。
储存液条件（Storageconditions）	10mMTris-HCl(pH8.0),1mMMgCl2,50mMKCl,0.1mMZnCl2,50%glycerol.
活性定义（Unitdefinition）	在pH9.8,37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
最佳pH（OptimalpH）	该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系（OptimalBuffer）	APBuffer(500mMTris-HCl,pH9.0;10mMMgCl2)

运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存，本酶在保存条件下及其稳定。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
1DNA去磷酸化
①在1.5ml离心管中加入下列试剂：

无菌ddH2O	Upto50µl
DNA片段*	1-20pmol
AlkalinePhosphatase	1-2µl
10×APbuffer	5µl

【*】：单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
②混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。
2酚氯,仿法抽提DNA
①苯酚/氯,仿/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5mMEDTA,0.5%SDS,50μg/mlProteinaseK的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
②氯,仿/异戊醇（24:1）抽提。
3乙醇沉淀DNA
①加入2.5µl3MNaCl(终浓度150mM).
②加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。
4溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。
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