一、材料

1.缓冲液和溶液

乙酸铵（10mol/L)

乙醇

2.酶和缓冲液

适宜的限制性内切核酸酶

大肠杆菌DNA聚合酶IKlenow片段

3.核酸和寡核苷酸

含适当未标记的dNTP各1mmol/L的dNTP溶液

模板DNA(0.1~5μg)

4.放射性复合物

[α-³²P]dNTP(10mCi/ml，比活性为800~3000Ci/mmol）

5.专用设备

SephadexG-50离心柱，用TE(pH7.6)平衡

预先设定至75℃的水浴

二、方法

1.在25~50μl的适当的限制酶缓冲液内，用所需限制酶消化高达5μg模板DNA。

2.向完成的限制酶消化反应中，加入：

10mCi/ml[α-³²P]dNTP        
（比活性800~3000Ci/mmol）    2~50μCi
未标记的dNTP             至终浓度为100μmol/L
Klenow片段                              1~5单位

室温温育反应15min。

3.于75℃加热10min以终止反应。

4.用SephadexG-50离心柱层析分离放射性标记的DNA与未掺入的dNTP或在2.5mol/L乙酸铵存在下进行两轮乙醇沉淀。