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RNA提取对于科研人员来说并不陌生,但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上,现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要,为什么往往提取的RNA却容易失败呢?
RNA提取失败的主要现象有三个:提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢?
首先,要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分,但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键,但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时,使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便,同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外,如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中,可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化,减少实验组间的误差。
其次,选择合适的提取试剂是最重要的一步。好的提取试剂在确保成功的同时,操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,进一步丰富了TakaraRNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统,无需苯酚氯仿抽提等步骤,简单快捷。组织或细胞裂解后,提取操作仅需20分钟便可完成。
对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点,Takara精心研发的柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以轻松解决这个问题。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地从各种简单的植物组织材料(叶片、茎、幼苗等)、富含多糖多酚的植物组织材料(果实、种子等)、真菌提取高纯度的TotalRNA,适用范围广泛。按照标准流程,本试剂盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可选步骤提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂,无需额外购买其它试剂。
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回复:时间:2016-07-06
xiaozhameng我用takara的rizol提取的总rna为什么260/230一直很低,那些方面的问题呢???师兄姐们有没有遇到过同样的问题A260/A280的比值,是用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品其比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在RNA、蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等。OD260/230值低的原因就是核酸中存在污染物,很可能是你使用融解DNA的缓冲液有污染,或者是因为调零不准、比色皿没有洗干净等。takara也有提RNA的试剂盒,用着还可以。可以不用trizol来提取RNA。
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回复:时间:2016-07-12
TRIzon(RNA提取试剂盒)产品介绍EngreenTRIzon是基于异硫氰酸胍/苯酚法的一种即用的从细胞和组织中提取总RNA的试剂,在样品裂解或匀浆过程中,EngreenTRIzon可保持RNA完整性,同时裂解细胞,溶解细胞内含物。加入氯仿后,溶液分为水相、中间层和有机相,RNA在水相中。取出水相,用异丙醇可沉淀回收RNA;中间层用乙醇沉淀可回收DNA;有机相用异丙醇沉淀可回收蛋白。应用范围EngreenTRIzon抽提所得RNA可直接用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNaseprotectionassay,CDNA克隆,以及RT-PCR;也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序(deepsequencing)等对RNA质量要求较高的情况。主要特点所得RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。卓越的细胞溶解能力,轻松应对各类待提样品。保持样品RNA的完整性,有效抑制RNA降解。对动植物细胞或组织以及血清、病毒和细菌均适用
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