SpectrophotometricAnalysisofrRNA

LEVELI

Materials

• RNA
• UVspectrophotometerandcuvettes
• Alkalinedistilledwater

Procedure

1. Dissolve10mgofcommercialRNAin250ml.ofslightlyalkalinedistilledwater.Useavolumetricflaskandproperanalyticaltechnique.Thiswillgiveastandardsolutionof40microgramsRNA/ml.

2. Prepareaseriesofdilutionssothatyouhave40,20,10,5and2.5microgramsofRNAperml.

3. TurnonaUVspectrophotometerandadjustthewavelengthto260nm.Usethealkalinewatertoblankthespectrophotometerat260nm.

4. ReadtheAofeachofthestandards.PlottheAvstheconcentrationofRNAandcalculatetheextinctioncoefficient.

5. Dissolveyourisolated,precipitatedRNAin10.0mlofalkalinewater.Prepareaserialdilutionfor1/10,1/100,1/1000and1/10000.Measuretheabsorbanceofeachat260nmand,usingthedilutionwhichgivesareADIngbetween.1and1.5absorbanceunits,computetheconcentrationofRNAinyoursample.

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