NorthernBlotting

AdaptedfromMolecularCloning(Maniatis),CurrentProtocolsinMolecularBIOLOGy,andJ.YostLab(UMN)

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Objective:

NorthernblottingallowsdetectionofspecificRNAsequences.RNAisfractionatedbyagarosegelelectorphoresis,followedbytransfer(blotting)toamembranesupport,followedbyhybridizationwithDNAorRNAprobes.

Procedures:

Start=>ThisprotocolrequiresisolatedtotalRNAorpoly(A)+RNA.
1. YoumustfirstruntheRNAonadenaturinggel;aformaldehydeorglyoxal/DMSOgel.
2. Next,youneedtotransfertheRNAfromthegeltoasolidsupportmembrane,preferablynylon.
3. Once,themembranewiththeimmobilizedRNAisavailable,hybridizationwiththeappropriateprobeisrequired.

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