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Methylation of Fatty Acids (Kropinski Method)
蚂蚁淘
/发布时间:1545758245 /浏览量:204
MethylationofFattyAcids(KropinskiMethod)OBJECTIVE:Tomethylatefattyacidsinwholecellsorlipopolysaccharide.REAGENTS:
- Methanol-HydrochlorideReagentKit
- >10mgofwholecellsor1mgoflipopolysaccharide
- 400nmolesoffattyacidstandard(pentadecanoicacidsC15)
- Prepare1MMeOH-HClreagentaccordingtotheinstructiongivenwiththekit.
- Addinternalstandard(C15fattyacid)togiveafinalconcentrationof400nmoles/100ml(usually10mgofC15in100mlofreagent.
- Weigh10mgofwholecellsor1mgofLPSintoacleanscrew-captube.
- Add1mlofMeOH-HClreagent/internalstandardintoeachtubeandvortex.
- Heatat100oCfor20minutes.(Note:eachtubeshouldbeverywellsealedwithteflontapeandgreasetopreventevaporation.)
- Sonicateandheatat100oCovernight.
- Neutralizeaciditywith0.5NNaOH.TestpHwithpHpaper.
- Centrifugeinclinicalcentrifugefor5minutes.Savesupernatentincleanglassvial.
- DogaschomatographywithprogrammedREWHmethod.
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