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染色体GTG标本制备实验一基本方案
蚂蚁淘
/发布时间:1628098202 /浏览量:320
| 实验方法原理 | 非显带染色体除可根据形态分辨部分染色体，其他多数染色体难以确认，而显带技术则可使染色体纵向长度上出现不同带纹，以辨认全部染色体。GTG即G带，Trypsin（胰酶），Giemsa的简写。Giemsa染料是噻嗪——曙红染料，染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结构变成更疏水状态。由此可知，在G显带中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 染色体标本 试剂、试剂盒 | 胰酶HClBa（OH）2Giemsa染色液SSC 仪器、耗材 | 显微镜烘箱恒温箱染色缸
实验步骤 | 一、用品和试剂 0.25%胰酶（0.85%NaCl配制，pH为7.2-7.4），HCl，Ba（OH）2，Giemsa染色液，SSC。 二、操作步骤 1. 标本老化 按常规制备人外周血淋巴细胞染色体标本（未染色）气干后，经78℃烘箱2-3小时。取出置37℃恒温箱3天后预处理。 2. 胰酶预处理 将染色体标本浸入胰酶溶液（已置4℃冰箱稳1小时以上）中40-50秒，取出立即水洗去多余胰酶。 3. Giemsa染色 1∶10Giemsa染色液染色5-10分钟，洗去多余染料，气干。 4. 镜检 油镜下可见分散良好的染色体纵轴上呈现深浅不同带纹，即为可读标本。 注意事项 | 1. 常规制备的染色体标本，要有较多分裂相，分散良好，染色体长度适中。 2. GTG带的关键在于胰酶处理的时间。若染色体仍着色较深，带纹不明，则预处理时间不足，应延长预处理时间；若染色体变粗并显出毛糙边缘，甚至呈糊状，则为预处理过度，应适当缩短处理时间。 3. Giemsa染色时间要适中，时间短，着色不够，深浅带反差小；时间过长，着色深，亦影响带纹反差，不易识别。
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