1.培养细胞小玻片标本的制备根据所检测病毒种类，选择敏感细胞进行培养，如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞(BHK21细胞）培养，森林脑炎病毒用绿猴肾细胞(Vero细胞）培养，登革热病毒用白纹伊蚊传代细胞(C6/36细胞）培养。

按细胞培养方法，将其分装在有盖玻片的培养板或培养瓶中，置37℃温箱培养成单层细胞，然后接种病毒。接种病毒量及培养时间因病毒种类而异。

如乙型肝炎病毒接种的病毒滴度为约10-5,培养24h收片；森林脑炎病毒接种的病毒滴度为10^-6,24h收片；登革热病毒接种的病毒滴度为10-6,48h收片。

设未接种病毒的正常细胞作对照。感染和对照标本从培养板或培养瓶中取出后用0.01mol/LPBS漂洗2次，放滤纸上，干燥后放预冷丙酮中置-30~-28℃冰箱中固定30min,取出小片，室温干燥后装小瓶密封，置4℃冰箱保存备用。

2.鼻咽部上皮细胞涂片制备。患者先排净鼻咽部分泌物后，将蘸有生理盐水的鼻咽拭子顺下鼻道插入，擦拭鼻咽处或咽部扁桃体周围及前后咽壁，尽量获取上皮细胞，然后向清洁载玻片上轻压棉拭子，制成薄而均匀的涂片。每标本作4-5片，放室温晾干后，滴加冷丙酮置4℃冰箱中固定10min,室温下干燥后，置4℃冰箱保存或立即染色检测。

3.石蜡切片标本的制备从放血处死的小白鼠或尸检材料中，取鼠脑或其它组织材料，切3-4mm小片，置95%乙醇中4℃固定24h。在4℃下经无水乙醇I、II容器内顺次脱水，每容器1h。再用二甲苯浸15-30min至透明为止。将组织块放56℃浸蜡30min,制成蜡块，切片厚度为6-8µm。经二甲苯脱蜡，95%乙醇脱去二甲苯，再染色。具体方法同病理组织切片制备。蜡块可保存一年，经荧光染色仍保持抗原性和着色力。

4.冰冻切片标本制备将上述小白鼠按需要选择部位或尸检材料，切厚度为3-5mm小块，放冰冻切片机冷冻台上，用普通浆糊作支持物作冷冻切片，厚度为4-7µm,夏季室温超过20℃以上可用60g/L明胶作支持物，也可将切片机置于4℃卧式低温冰箱中进行。玻片粘片后立即放丙酮中，室温固定10-15min,即可荧光染色。

5.鼠脑及尸检材料印片制备

(1)热印片法：将载玻片通过酒精灯火焰数次，待温度达40℃左右时取脑组织轻轻印片，放室温干燥，在室温中用丙酮固定10min,即可进行染色。

(2)冷印片法：将载玻片放-20℃低温预冷，也可采用乙醇加二氧化碳干冰降温。将材料迅速印片，立即放入干燥缸中干燥后，置丙酮中固定10min,即可染色。