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免疫细胞化学缓冲液的配制
免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多,即使是同种缓冲液,其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。
1.0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液(PhosphateBuffer,PB)
试剂:NaH2PO42H2O
Na2HPO412H2O
配制方法:配制时,常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4,两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(PB),根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
(1)0.2mol/L的Na2HPO4;称取Na2HPO412H2O31.2g(或NaH2PO4H2O27.6g)加二次水
至1000ml溶解。
(2)0.2mol/L的Na2HPO4:称取NaHPO4.12H2O71.632g(或Na2HPO47H2O53.6g或
Na2HPO42H2O35.6g)加二次水至1000ml溶解。
(3)0.2mol/LpH7.4的PB的配制:取19ml0.2mol/L的NaH2PO4和81ml0.2mol/L的
Na2HPO412H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB(pH约为7.4~7.5)。若pH偏高或偏低,可通过改变二者的比例来加以调整,室温保存即可。
2.0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PhosphateBufferedSaline,PBS)
试剂:0.2mol/LPB50ml
NaCl8.5~9g(约0.15mol/L)
二次水至1000ml
配制方法:称取NaCl8.5~9g及0.2mol/L的PB50ml,加入1000ml的容量瓶中,最后加二次水至1000ml,充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS,则PB量加倍即可,依此类推。PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液,0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等,其pH应在7.25~7.35之间,否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下,0.2mol/LPB的pH值稍高些,稀释成0.01mol/L的PBS时,常可达到要求的pH值,若需调整pH,通常也是调PB的pH。
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