可溶性样品 组织样品准备 细胞 样品分级 实验方法原理 由于2-DE 所分析样品的多样性，没有一种制备方法可以普遍适用于各种样品，但有几点考虑一定要提出，很有必要尽量减少可能在 2-DE 谱中导致假点 (artifactualspot) 的蛋白质修饰，在实验中，含尿素的样品一定不要加热，因为加热后尿素分解产生的异氰酸盐可能对蛋白质产生氨某甲酰化修饰从而引起很大的电荷不均一性。此外，样品中的蛋白酶可以很容易地生成假点，因此，样品处理步骤应尽量少并保持冷冻环境。样品中可以加入蛋白酶抑制剂的混合物，但切记这些试剂可修饰蛋白，导致电荷假象 。 ......阅读全文

蒋华良研究组合作发表最新PNAS文章：蛋白互作界面预测

来自中科院上海药物研究所，美国莱斯大学的研究人员报道了最新研究成果，在可药性蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）界面预测与识别计算方法发展方面取得重要进展。这一研究成果公布在《美国国家科学院院刊》（PNAS）杂志上，文章的通讯作者是上海药物研究所蒋华良研究员，以及莱斯大学José N. Onuchic博

哈佛学者通过评估基因突变探秘蛋白质3D结构

随着测序技术的不断发展，基因组测序已经变成一件平常的事情。在国外，越来越多的人可以从药店自行购买DNA测试盒，取样完成后寄给基因测序公司获取报告。我们不得不承认，如今基因分析在洞见人类遗传、疾病和健康方面有着不言而喻的先见性。但是即便是在当下基因分析红透半边天的时代，DNA指导合成蛋白质却仍存有

聚丙烯酰胺凝胶电泳仪分析技术（三）

适用的凝胶总浓度：2%～5%（2）核酸相对分子量与凝胶总浓度的关系：1）核酸相对分子量范围：＜1×104适用的凝胶总浓度：15%～20%2）核酸相对分子量范围：1×104～1×105适用的凝胶总浓度：5%～10%3）核酸相对分子量范围：1×105～2×106适用的凝胶总浓度：2%～2.6%用于大分子

抗原的制备方法

抗原的制备 除完整的细胞可作为抗原外，各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质，也都具有全抗原或半抗原的性质，某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的，可作为这种细胞的一个标志。由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质，有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质，以供科学研究之用。 一、抗原的提取

大豆蛋白的提取与含量测定

序言 蛋白质化学实验蛋白质是一切生物体内重要的组成成份，蛋白质是由二十多种氨基酸以肽键相互联接而成的复杂的高分子化合物，溶于水时形成亲水胶体溶液。在酸碱和酶的作用下，蛋白质被水解成胶胨肽最后形成氨基酸。蛋白质分子依靠氢键、盐键等副价键维持一定的空间构型。在各种物理化学因素影响下，由于副价键的破裂，使

赛默飞世尔科技：为蛋白质组学提供深层次解决方案 【导语】 毫不夸张地说，蛋白质组学的兴起推动了整个质谱的研发和应用，使质谱产品层出不穷，并应用于更多的组学、更多的复杂体系研究中。蛋白质组学面临的挑战也促使质谱的研发者们不断推出创新的技术，比如第6种质量分析器Orbitrap的出现，以及随之出现的一系列新的研究流程和方法。在第六届AO

燃烧法测定蛋白质含量可以辨别掺杂吗

在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建

双缩脲法和凯氏定氮法测定饲料中蛋白质含量的比较...

饲料蛋白质含量的测定通常采用国标规定的凯氏定氮法, 但用双缩脲比色法测定饲料中蛋白质含量也有报道( 陈革, 2003) 。本实验对多种饲料样品采用双缩脲比色法进行蛋白质含量测定,并将结果与凯氏定氮法进行对比和分析, 为实际工作中选择合理的方法进行饲料中蛋白质含量的测定提供科学依据。1 双缩脲法原理当

荧光光谱法在蛋白质研究中的应用

1.利用蛋白质的天然荧光检测蛋白质的构象变化 利用蛋白质中的芳香族氨基酸残基的侧链基团具有吸收紫外区域的入射光从而发射荧光的特性，来研究蛋白质在变性或复性过程中整体空间构象的变化。其基本机理是:荧光来源于生色团基团在不同电子能级之间的跃迁，荧光频率取决于能级之间的能量差，生色

一文读懂Native ESI-MS如何监测SEC分离过程中蛋白质变性

尺寸排阻色谱（SEC）与非变性电喷雾电离质谱（Native ESI-MS）联用技术是研究天然蛋白质的有效工具。但已报道的研究大多集中于技术应用，并未验证蛋白质在所用分离条件下是否处于原始状态，也未评估SEC洗脱条件对蛋白质-固定相的相互作用和蛋白质变性的影响。近期发表在Analytical Ch

层析技术(Layer-analise technique)

离子交换层析技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相，以蛋白质等样品为移动相，分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素和多糖等的一项技术。（一）原理在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团，当结合阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。如二乙氨乙基（Dicthylaminoethyl，

电泳技术

电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的

蛋白质沉淀技术（三）

3.策略 C 的基本操作程序(1) 配制 10%(V/V)[5%(m/V)] 的 PEI 储存液。PEI(WV) 常以 50%(m/V) 的黏稠液体状态存在（来自于 MPBiochemicals 的 PEI, 其相对分子质量 Mw=50000?100000, 也可采用其他来源，如 Sigma 和

三氯乙酸-丙酮法提取植物全蛋白实验

实验材料植物试剂、试剂盒三氯乙酸β-巯基乙醇丙酮R2D2 蛋白质溶解缓冲液UKS 蛋白质溶解缓冲液IPG 胶条水化液仪器、耗材研钵和研槌实验步骤 1. 蛋白质沉淀与变性( 1 ) 用研钵和研槌在液氮中将植物材料研磨成细小的粉末（ 见注释 4) 。( 2 ) 将约

滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验_凝胶过滤层析法

凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术，又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离，而不需要蛋白质的化学结合，这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外，可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤，还不能一概而论，有时纯

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（五）

六、CID、ECD和 ETD的对比基于质谱的蛋白质组学分析依赖于气相中肽段在低碰撞能量下断裂, 在质量谱图中形成峰。进而通过峰图确定肽段序列，再推断出相关蛋白质。完成肽段断裂最主要的方法就是碰撞诱导解离（collision induced dissociation，C I D ) ( S w

检测细胞凋亡的实验方法比较-2

二、细胞凋亡的细胞化学测定细胞凋亡的细胞化学测定包括细胞表面（细胞膜）的结构和通透性改变的测定和细胞核DNA改变的测定。根据应用的范围，又可分为细胞群休和单个细胞测定两种，以下仅介绍其中几种较为常用的方法。碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞

水稻叶片和根蛋白质的纳升级二维液相色谱串联...（二）

3.5 二维纳升级高效液相色谱分离肽段柱切换分离是一种在线分离方法，通过 HPLC 缓冲液连续洗脱双相柱，使洗脱液进入质谱仪，以确保在上样、盐洗脱和冲洗柱的过程中不丢失样品。第一相根据电荷性质分离肽段，第二相是根据疏水特性分离肽段。( 1 ) 将 10 μl 样品注入 10 μl 自动进样环中，完成

蛋白质组学在高端心血管研究中的应用

Dr Manuel Mayr，King’s College London and Dr Paul Humphrey，Thermo Fisher Scientific本文将讨论伦敦国王学院采用的蛋白质组学解决方案在先进的心血管研究中的重要性。引言蛋白质组学是对蛋白质的大范围分析，被认为是生物系统研究的

肽质量指纹图谱—MALDI-TOF 法鉴定蛋白质实验

实验材料测序级猪胰蛋白酶试剂、试剂盒碳酸氢铵碳酸氢铵缓冲液乙腈 碳酸氢铵缓冲液消化缓冲液仪器、耗材真空离心机烤箱实验步骤许多凝胶染色方法适用于后续的 MALDI-TOF 肽质量指纹图谱（PMF ) 分析。在第 14 章已经比较讨论了一些染色方法的性能和兼容性。3.1 胶内消化凝胶消化方法改编自 Je

蛋白质纯度测定实验（一）

在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。

抗原的制备-1

抗原的制备 除完整的细胞可作为抗原外，各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质，也都具有全抗原或半抗原的性质，某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的，可作为这种细胞的一个标志。由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质，有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质，以供科学研究之用。 一、抗原的提取

报告专家：美国密歇根大学癌症研究中心主任 Gilbert S.Omunm 教授 报告题目：另类作为血浆和组织中蛋白肿瘤生物标记物新的结合变异体与人的血浆有机体有关系 另类结合产生蛋白多样化，而并没有增加基因组大小，这是对人体中相对不多的蛋白质编码基因有趣的解释。蛋

Science推翻长期以来的定论：蛋白质变性全新理论

生物通报道：敲开一个鸡蛋，滑入热煎锅中，几乎立刻透明和滑溜的蛋清就变白，变硬，在这个过程中我们观察的煎鸡蛋过程，就是生活中十分常见的蛋白质变性这一重要的生化现象。 细胞中蛋白质则是线状分子，缠绕在一起组成蛋白质特异性结构：有些球形，有些是管状的，各不相同。这些结构都会在变性过程中崩解，蛋白质再

蛋白质组学解决方案在高端心血管研究中的应用

Dr Manuel Mayr，King’s College London and Dr Paul Humphrey，Thermo Fisher Scientific 本文将讨论伦敦国王学院采用的蛋白质组学解决方案在先进的心血管研究中的重要性。 蛋白质组学是对蛋白质的大范围分析，被认为是生

Nature Methods | 朝思暮想：单细胞蛋白质组测序之梦

近期，Nature Methods 杂志技术编辑Vivien Marx发表文章 A dream of single-cell proteomics，探讨了单细胞蛋白组学的发展，提出了该技术有可能会面对的问题和潜在解决方案。单细胞蛋白质组测序的梦想并不遥远（Credit: S. Larochell

MALDI-MS：蛋白组学研究的推动力

有如此多的蛋白质需要研究，蛋白组学专家感觉到需要加快速度了。基质辅助激光解吸质谱，或称作MALDI- MS因此应运而生。范德比特大学（Vanderbilt University）医学院质谱研究中心主任Richard Caprioli博士表示：“只要样品制备顺利完成，就可以很轻松地在接下来的步

食用蛋白粉误区知多少

食品与营养信息交流中心科学技术部主任 阮光锋 最近几年，蛋白粉越来越流行，随便逛逛购物网站，各种蛋白粉产品让人眼花缭乱。有说法称蛋白粉可以增肌、减肥，还能增强免疫力，这让很多人对它趋之若鹜。不过，我们真的缺蛋白质吗？我们普通人需要吃蛋白粉吗？ 蛋白粉营养不全面 蛋白粉其实就是高纯度的蛋白

肽质量指纹图谱—MALDI-TOF 法鉴定蛋白质实验（二）

1. 目标样本沉积1 ) 经典干燥液滴法( 1 ) 半饱和氰基-4-羟基肉桂酸（约 5 mg/ml) 的配制：将 α-氰基-4-羟基苯甲酸溶解在 300 μl 1 : 1 乙腈/ TFA 溶 液（超声 10 min) 。离心几秒钟得到上清液。取 200 μl 上清液加到微量离心管中，