2010-01-19【求助】请教拟南芥茎石蜡切片出现细胞和组织破裂的解决办法

石蜡切片制作方法I 第一天：固定FAA固定液： % In Mixture Amount乙醇　　　　50.0% 50ml　　　　　　　　　醋酸5.0%5ml　　　　　　　　　甲醛3.7%10ml of 37%　　　　　　　　　水41.3% 35ml total100ml取新鲜材料，立即放入FAA固定液中。真空抽气机缓慢抽气１５分钟（看材料是否下沉，如果没有下沉，可以再抽15分钟，直到保证材料下沉为止。），换一次固定液，使材料在固定液中诱导3小时以上（可以保存）。注意：取材应尽可能小；固定液的体积要是材料体积的20倍以上；换一次固定液的原因是因为在抽气的过程中乙醇和醋酸会挥发走，影响它们的浓度。II 第二天　脱水将固定的材料取出（或直接倒掉固定液），加50％乙醇，室温下诱导30分钟，重复一次。再经60%乙醇－70%乙醇－85% 乙醇，室温各诱导30分钟。之后于含有0.1%伊红的95%乙醇中过夜；注意：１）换溶液时，最好是将溶液倒出，再加入新溶液。应尽量避免用镊子夹取材料；２）加入伊红的主要目的是使包埋时容易辨认，由于经过脱水浸蜡后颜色会褪去一部分，因此此时的染色应较深一些为好。　III 第三天　透明将材料转移到100 %乙醇溶液中诱导１小时，尽可能地倒掉上述的100 %乙醇后再转入新的100%乙醇溶液中诱导30分钟；再次100%乙醇溶液诱导30分钟。经二甲苯：乙醇＝1/4：3/4，1/2：1/2，3/4：1/4（体积比）各诱导30分钟；换入纯二甲苯，室温诱导1小时，重复两次。最后加入一半二甲苯一半石蜡，室温过夜。注意：材料在无水乙醇中容易收缩，不能放置时间较长。IV 第四天　浸蜡将混合溶液放入４２℃恒温箱中保温３０分钟，逐步加入石蜡碎片，每次各保温３０分钟（适时地摇晃一下），直到加满为止（约四到五次后至全满）。将混合液弃去，加入熔融的石蜡（石蜡最好提前５小时放入６０℃恒温箱中，使其融化）放置于57-62℃诱导４小时以上（也要适时地摇晃一下）。至少重复六次。注意：不要将混有二甲苯的石蜡放入换纯蜡的恒温箱中，避免污染。V第五天　浸蜡VI第六天　包埋将事先折好的纸槽放在温台上（或调温为60℃的烘箱中），将材料和石蜡一起倒入其中，用预热的解剖针轻轻拨动材料摆正位置。放入事先准备好的水槽中迅速冷却。包埋好的蜡块放置于４℃冰箱中保存，备用。注意：包埋的速度应尽量的快些，以防石蜡凝结。VII切片、粘片将修好的梯形蜡块粘在小木块上，切片，厚度一般为7－10μm（高要求的可能需要在6-8μm）。从乙醇中取出洗净的载玻片，摔干后每片加上3.5微升的POLY-L-LYSINE（1mg/ml），用盖玻片涂满整个载玻片，于42C干燥过夜，注意：１）蜡块应修的近似于长方体或平台形，注意各边一定要平行；２）载玻片一定要清洁；３）粘片时要注意粘贴剂的用量，展片时要把握好时间。附：载玻片的清洗方法（1）用绸布醮温肥皂水轻轻擦洗，后清水冲洗；（2）洗液浸泡过夜，流水冲洗干净；（3）换蒸馏水冲洗，凉干；（4）95%乙醇中保存备用。VIII脱蜡、染色根据试验的目的选择不同的染色方法。附：番红染色方法，如下所示：二甲苯（20分钟）→二甲苯（15分钟）→1/2二甲苯：1/2无水乙醇（1-5分钟）→无水乙醇（2分钟）→无水乙醇（2分钟）→95%乙醇（1分钟）→85%乙醇（1分钟）→70%乙醇（1分钟）→50%乙醇（1分钟）→蒸馏水（1分钟）→番红（2-24小时）→70%乙醇（30秒）→85%乙醇（30秒）→95%乙醇（30秒）→100%乙醇（1分钟）→100%乙醇（1-2分钟）→二甲苯（3分钟）→二甲苯（10-30分钟）注意：１）番红在乙醇中容易脱色，因此染色后在乙醇中防置的时间应尽可能的短些。２）二甲苯和无水乙醇很容易挥发，用一段时间后要更新。IX 镜检、封片用加拿大树胶将所需的切片封固。

楼主这个问题解决了没？我遇到和楼主一样的问题