2016-05-31求助！小鼠脑组织石蜡切片染色脱片

求助！先自己顶。

脱水的时间你是参考的文献还是自己摸索的？个人觉得脱水不够。我处理脑片脱水是70%过夜，80%，90%各两个小时，95%，100%各一个小时，切片厚度是5μm，没有脱过片。脱水时间够不够可以通过透明的程度来反应，组织透明效果不好的很大原因是脱水不够

展开引用Justin001脱水的时间你是参考的文献还是自己摸索的？个人觉得脱水不够。我处理脑片脱水是70%过夜，80%，90%各两个小时，95%，100%各一个小时，切片厚度是5μm，没有脱过片。脱水时间够不够可以通过透明的程度来反应，组织透明效果不好的很大原因是脱水不够......透明的时候大约50min能够完全透明，从酒精进入二甲苯的时候组织周围不起雾，没有白色的出现。

展开引用Justin001脱水的时间你是参考的文献还是自己摸索的？个人觉得脱水不够。我处理脑片脱水是70%过夜，80%，90%各两个小时，95%，100%各一个小时，切片厚度是5μm，没有脱过片。脱水时间够不够可以通过透明的程度来反应，组织透明效果不好的很大原因是脱水不够......求助老师，通常透明时间是多久？组织完全透明是已经透明过度了么？

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展开引用Justin001yan1091038778Justin001脱水的时间你是参考的文献还是自己摸索的？个人觉得脱水不够。我处理脑片脱水是70%过夜，80%，90%各两个小时，95%，100%各一个小时，切片厚度是5μm，没有脱过片。脱水时间够不够可以通过透明的程度来反应，组织透明效果不好的很大原因是脱水不够求助老师，通常透明时间是多久？组织完我用的脱水时间就是上面说的，透明我就用的二甲苯共45分钟（分两次），量要够。......您做的是大鼠吗？我脱水时间是参照《实验病理学技术图鉴》这本书，您的脱水时间和上面大鼠的脱水时间差不多。透明时间书上面大鼠加起来是2h，小鼠是8min。您做好透明后组织是全通透的还是按照时间做完后就取出组织？我的脱片原因会不会是透明时间过久？

展开引用yan1091038778Justin001yan1091038778Justin001脱水的时间你是参考的文献还是自己摸索的？个人觉得脱水不够。我处理脑片脱水是70%过夜，80%，90%各两个小时，95%，100%各一个小时，切片厚度是5μm，没有脱过片。脱水时间够不够可以通过透明的程度来反应，组织透明效果不好的很大原因是脱水不够求助老师，通常透明时间是多久？组织完我用的脱水时间就是上面说的，透明我就用的二甲苯共45分钟（分两次），量要够。您做的是大鼠吗？我脱水时间是参照《实验病理学技术图鉴》这本书，您的脱水时间和上面大鼠的脱水时间差不多。透明时间书上面大鼠加起来是2h，小鼠是8min。您做好透明后组织是全通透的还是按照时间做完后就取出组织？我的脱片原因会不会是透明时间过久？......小鼠的脑脱水我用的这个时间。8分钟是完全没可能把小鼠脑的水脱干净的，水没脱好，二甲苯也就进不了组织，浸蜡的时候蜡也进不了组织，没有蜡支撑组织切片也就切不出来。透明的这个时间我是摸索了一段时间的，效果不错就确定的45分钟

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展开引用yan1091038778Justin001yan1091038778Justin001yan1091038778Justin001脱水的时间你是参考的文献还是自己摸索的？个人觉得脱水不够。我处理脑片脱水是70%过夜，80%，90%各两个小时，95%，100%各一个小时，切片厚度是5μm，没有脱过片。脱水时间够不够可以通过透明的程度来反应，组织透明效果不好的很大原因是脱水不够求助老师，通常透明时间是多久？组织完我用的脱水时间就是上面说的，透明我就用的二甲苯共45分钟（分两次），量要够。您做的是大鼠吗？我脱水时间是参照《实验病理学技术图鉴》这本书，您的脱水时间和上面大鼠的脱水时间差不多。透明时间书上面大鼠加起来是2h，小鼠是8min。您做好透明后组织是全通透的还是按照时间做完后就取出组织？我的脱片原因会不会是透明时间过久？小鼠的脑脱水我用的这个时间。8分钟是完全没可能把小鼠脑的水脱干净的，水没脱好，二甲苯也就进不了组织，浸蜡的时候蜡也进不了组织，没有蜡支撑组织切片也就切不出来。透明的这个时间我是摸索了一段时间的，效果不错就确定的45分钟多谢老师指导，另外问老师两个关于细节方面的处理。一是固定好的组织要用流水冲洗很长一段时间吗（之前做是用pbs冲了一下）？二是烤片之后要冷却至室温再进行脱蜡吗（之前是从60℃烘箱拿出来装在染色架上后接着就脱蜡）？上面两个细节处理不好会是导致图上问题的原因吗......我的话是固定后用PBS冲洗了几次，主要是去除表面过多的固定液，再用吸水纸稍微吸一下。我是每次烤完片冷却了放一段时间再脱蜡，刚烤片，片子还没有贴上去，马上脱蜡是会容易脱片。担心脱不干净可以冷却一段时间后再放温箱的烤几分钟再去脱蜡

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我也出现了和楼组一样的情况，想请问楼主现在解决了吗？

前期没有处理好吧，

楼主您好，我最近做小鼠的一半脑的石蜡切片，也遇到您一样的问题，脱片之后的图样都几乎相似。请问您的问题最后是怎么样解决的呢？期待您的恢复。