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因为研究的是细菌，做了一组细菌的流式细胞仪的凋亡试验，发现99%都是Q4活细胞，第Q1.Q2.Q3象限很少，FITC和PI双染，BD的试剂盒，按照说明书PBS洗两次，之后buffer重悬后测的，今天又重新做了一组，这次把菌液调到pH12，并且用超声处理过，但是还是99%活细胞，块崩溃了。。。
看到论坛上也有之前的帖子，但是帖子没说后来是怎么处理的，**各位大神不吝赐教，5555555
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回复：时间：2016-11-25
怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌？是否有合理的对照说明这一点？细菌比细胞一般小得多，它在FSC-SSC上的位置更靠左下，但是这个位置很可能是碎片的噪声，而非你想检测的细菌，BD的试剂盒子是检测细胞的吗？可能拿来做细菌要摸索一下条件，FITC标记的是什么？
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回复：时间：2016-11-20
怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌？是否有合理的对照说明这一点？细菌比细胞一般小得多，它在FSC-SSC上的位置更靠左下，但是这个位置很可能是碎片的噪声，而非你想检测的细菌，BD的试剂盒子是检测细胞的吗？可能拿来做细菌要摸索一下条件，FITC标记的是什么？
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回复：时间：2016-11-26
展开引用热爱医学的小猪怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌？是否有合理的对照说明这一点？细菌比细胞一般小得多，它在FSC-SSC上的位置更靠左下，但是这个位置很可能是碎片的噪声，而非你想检测的细菌，BD的试剂盒子是检测细胞的吗？可能拿来做细菌要摸索一下条件，FITC标记的是什么？......谢谢您的回复，我刚开始做流式细胞，很多地方不懂，这个图是实验室的老师给做出来的，他之前也没有做过细菌，做细胞很多，按照做细胞的经验取的左下角，BD的试剂盒是AnnexinV-FITC/PI双染测细胞凋亡的，如果是碎片，有没有什么办法检测到细菌，条件应该怎么摸索呢？
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回复：时间：2016-11-21
展开引用dxy_bev82n3热爱医学的小猪怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌？是否有合理的对照说明这一点？细菌比细胞一般小得多，它在FSC-SSC上的位置更靠左下，但是这个位置很可能是碎片的噪声，而非你想检测的细菌，BD的试剂盒子是检测细胞的吗？可能拿来做细菌要摸索一下条件，FITC标记的是什么？谢谢您的回复，我刚开始做流式细胞，很多地方不懂，这个图是实验室的老师给做出来的，他之前也没有做过细菌，做细胞很多，按照做细胞的经验取的左下角，BD的试剂盒是AnnexinV-FITC/PI双染测细胞凋亡的，如果是碎片，有没有什么办法检测到细菌，条件应该怎么摸索呢？......我觉得首先要证明你收到的信号确实是来自于细菌的，可以跟流式的老师交流下，一般细菌小，所以需要的阈值低一些，不过检测细菌是没问题的，可以以纯水为对照，两管比较一下就知道了，多思考多看书
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回复：时间：2016-11-21
展开引用热爱医学的小猪dxy_bev82n3热爱医学的小猪怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌？是否有合理的对照说明这一点？细菌比细胞一般小得多，它在FSC-SSC上的位置更靠左下，但是这个位置很可能是碎片的噪声，而非你想检测的细菌，BD的试剂盒子是检测细胞的吗？可能拿来做细菌要摸索一下条件，FITC标记的是什么？谢谢您的回复，我刚开始做流式细胞，很多地方不懂，这个图是实验室的老师给做出来的，他之前也没有做过细菌，做细胞很多，按照做细胞的经验取的左下角，BD的试剂盒是AnnexinV-FITC/PI双染测细胞凋亡的，如果是碎片，有没有什么办法检测到细菌，条件应该怎么摸索呢？我觉得首先要证明你收到的信号确实是来自于细菌的，可以跟流式的老师交流下，一般细菌小，所以需要的阈值低一些，不过检测细菌是没问题的，可以以纯水为对照，两管比较一下就知道了，多思考多看书......老师也不太确定信号是不是细菌的，纯水对照我一会跟老师说一下，谢谢您的思路！
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回复：时间：2016-11-28
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回复：时间：2016-11-28
1.你这个流式做的很差。FSC和SSC的图可以明显看出，原因有可能是没有分散好，细胞成团了。2.图二看上去似乎你也没有调补偿？总之你这个结果没有什么参考意义。
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